游离黄酮和蒽醌的提取都可以采用什么方法

离。

二 分离方法：

1 蒽醌苷类和游离蒽醌衍生物的分离：用分步提取法（如前述） 2 游离蒽醌衍生物的分离：可选用分步结晶法、梯度pH萃取法或层析法进行。

梯度pH萃取法是分离游离蒽醌衍生物的经典方法：

1局限性

2原理 性质相似，酸性差别不大的混合物不适用

3 有些蒽酮虽然存在酚羟基，但在稀碱溶液中较相应的蒽醌难溶，

如大黄酚蒽酮-9，故蒽醌衍生物的苯提取液用极稀的NaOH液萃取，可除去蒽醌而使蒽酮留在苯液中。 示例

色谱法在蒽醌苷元分离中的应用：

一般先用经典方法（如梯度pH萃取）对其进行初步分离，再结合柱色谱法或制备性TLC法作进一步的分离，多用硅胶吸附色谱，而氧化铝一般不用，也常用聚酰胺作为柱色谱的填料。

•

三、 黄酮类化合物的提取与分离

（一）提取

黄酮甙类以及极性稍大的甙元（如羟基黄酮等），一般可

用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖甙类可用沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入少量酸（01%盐酸，应当慎用，避免发生水解）。

剂进行提取。对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有：

（一）溶剂萃取法 利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。

有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。

溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离甙和甙元或极性甙元与非极性甙元的效果。

（二）碱提取酸沉淀法 黄酮甙类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，黄酮甙类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的提取都应用了这个方法。

兹以从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。 槐米（槐树Sophora japonica L 花蕾）加约6倍量水，煮沸，在搅拌

下缓缓加入石灰乳至pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热油滤，残渣同上再加4倍水煎1次，乘热抽滤。合并滤液在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，60℃干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，70~80℃干燥得

芦丁纯品。

在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成（金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。

当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药

材，宜用石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。

（三）碳粉吸附法 主要适于甙类的精制工作。通常，在

植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集吸甙炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定性检查（或用PPC鉴定）。通过对Baptisia lecontei 中黄酮类化合物的研究证明，大部分黄酮甙类可用7%酚/水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩至小体积，再用乙醚振摇除去残留的酚，余下水层减压浓缩即得较纯的黄酮甙类成分。

大黄可减轻内毒素性低血压，消除氧自由基，降低再灌注期血浆、肺、小肠等内源性一氧化氮的水平，降低肠、肝、肺毛细血管通透性，减轻内毒素引起的肠壁血管通透性增加，防止肠道细菌移位及内毒素进入血循环等等。临床可用于严重创伤、感染性休克、MODS等危重病预防及治疗胃肠功能衰竭。我们的经验：生大黄30克煎成100ml，灌肠或口服，100ml,1-3次/日，亦可灌肠和口服并用。直到肠鸣音恢复开始减量　大黄含有蒽类衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸类、挥发油类等。

　　1 蒽类衍生物分为：⑴ 游离蒽醌衍生物，如芦荟大黄素（aloe emodin）、土大黄素（chrysaron）、大黄酚（chrysophanol）、大黄素（emodin）、异大黄素（isoernodin）、虫漆酸D（laccaic acid D）、大黄素甲醚（physcion）、大黄酸（rhein）；⑵ 结合蒽醌化合物，有大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚的单和双葡萄糖甙；大黄素、大黄素甲醚的单糖甙；蒽酚和蒽酮化合物：大黄二蒽酮（rheidin）、掌叶二蒽酮（palmidin）以及与糖结合的甙如番泻甙（sennoside）A、B、C、D、E、F等。

　　2 苷类化合物：土大黄甙（rhaponticin）、3，5，4’-三羟基芪烯一4’-O-β-D-（6’-O-没食子酰）葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy-stilbene－4’-O-β-D-（6’-O-gallayl）-glucoside）、3，5，4’-三羟基茋烯-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy stilbene-4’-O-β-D-glucopyranoside）。

　　3 萘衍生物：torachrysone-8-O-β-D-glucopy ranoside，torachrysone-8-（6′-oxaly）-glucoside及决明松（torachryson）。

　　4 鞣质类：没食子酰葡萄糖、d-儿茶素、没食子酸、大黄四聚素（tetrann）等。大黄四聚苯经水解，得没食子酸、肉桂酸及大黄明（rheosmin）。此外合有树脂。

　　尚含有有机酸：苹果酸、琥珀酸、草酸、乳酸、桂皮酸、异丁烯二酸、柠檬酸、延胡紊酸等。

　　大黄中还含有挥发油、脂肪酸及植物甾醇等。本品横切面：根木栓层及皮层大多已除去。韧皮部明显；薄壁组织发达。形成层成环。木质部射线较密，宽2～4列细胞，内含棕色物；导管非木化，常1至数个相聚，稀疏排列。薄壁细胞含草酸钙簇晶，并含多数淀粉粒。根茎髓部宽广，其中常见黏液腔，内有红棕色物；异型维管束散在，形成层成环，木质部位于形成层外方，韧皮部位于形成层内方，射线呈星状射出。粉末黄棕色。草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成。

　　取本品粉末少量，进行微量升华，可见菱状针晶或羽状结晶。

　　取本品粉末01g，加甲醇20ml浸渍1小时，滤过，取滤液5ml,蒸干加水10ml使溶解，再加盐酸1ml,置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材01g,同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸(155:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙**荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙**荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

　　检查

　　土大黄苷 取本品粉末02g，加甲醇2ml,温浸10分钟，放冷，取上清液10μl,点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。

　　干燥失重 取本品，在 105℃干燥6小时，减失重量不得过150％（附录Ⅸ G）。

　　总灰分 不得过100％（附录Ⅸ K）。

　　酸不溶性灰分 不得过08％（附录Ⅸ K）。

　　含量测定

　　照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。

　　色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-01％磷酸溶液(85:15)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。

　　对照品溶液的制备 精密称取大黄素、大黄酚对照品各5mg，分别置50ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1ml、大黄酚溶液2ml，分别置25m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含4μg、大黄酚每1ml中含8μg)。

　　供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约01g[同时另取本品粉末测定水分(附录ⅨH 第二法)]，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加25mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次约8ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　本品按干燥品计算，含大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量不得少于005％。

　 2018初级中药师第四单元《蒽醌类化合物》测试题

　A型题

　1大黄素型和茜草素型主要区别于( )。

　A羟基位置

　B羟基数目

　C羟基在苯环上的位置

　Dα-OH数目

　Eβ-H数目

　2番泻苷属( )。

　A单蒽核类

　B双蒽核类

　C大黄素型

　D茜草素型

　E氧化型

　3下列化合物中属于二蒽酮母核的是( )。

　A番泻苷B

　B大黄酸葡萄糖苷

　C芦荟大黄素苷

　D大黄素葡萄糖苷

　E大黄素龙胆双糖

　4游离蒽醌衍生物酸性最弱的是( )。

　A含-C00H者

　B含2个以上α-0H者

　C含1个β-OH者

　D含2个以上β-OH者

　E含1个α-OH者

　5能与碱反应呈红色的化合物是( )。

　A羟基蒽酮类

　B羟基蒽酚类

　C羟基蒽醌类

　D二蒽酚类

　E二蒽酮类

　6采用色谱方法分离蒽醌类成分时，常不选用的吸附剂是( )。

　A硅胶

　B氧化铝

　C聚酰胺

　D磷酸氢钙

　E葡聚糖凝胶

　7下列游离蒽醌混合物的乙醚溶液，能够被5%碳酸氢钠溶液萃取出来的是( )。

　A大黄素

　B大黄酚

　C芦荟大黄素

　D大黄酸

　E大黄素甲醚

　8具有二蒽酮苷的是( )。

　A芦荟苷

　B番泻苷A

　C紫草素

　D丹参酮类

　E大黄素

　9大黄中的成分属于( )。

　A蒽醌

　B对羟基蒽醌

　C对苯醌

　D邻菲醌

　E以上都不是

参考答案、考点与解析

　A型题

　1答案C

　考点蒽醌类化合物的结构与分类★★★

　解析大黄素型的羟基分布在两侧的苯环上，多数化合物呈**;茜草素型的羟基分布在一侧的苯环上，化合物颜色较深，多为橙**至橙红色。

　2答案B

　考点蒽醌类化合物的结构与分类★★★

　解析双蒽核类包括二蒽酮类、二蒽醌类，以及去氢二蒽酮类等，其中以二蒽酮类化合物较重要。二蒽酮类化合物可以看成是两分子蒽酮脱去一分子氢，通过碳碳键结合而成的化合物。其结合方式多为C10-C10，也有其他位置连接。例如大黄及番泻叶中致泻的主要有效成分番泻苷A、B、C、D等皆为二蒽酮衍生物。

　3答案A

　考点蒽醌类化合物的结构与分类★★★

　解析参见A型题第2题解析。

　4答案E

　考点蒽醌类化合物的理化性质★★

　解析游离蒽醌类衍生物的酸性强弱按下列顺序排列：含COOH>含2个或2个以上β-OH>含1个β-OH>含2个或2个以上α-OH>含1个α-OH。

　5答案C

　考点蒽醌类化合物的理化性质★★

　解析Borntrager反应羟基醌类在碱性溶液中发生颜色改变，会使颜色加深。多呈橙、红、紫红及蓝色。羟基蒽醌以及具有游离酚羟基的蒽醌苷均可呈色，但蒽酚、蒽酮、

　二蒽酮类化合物则需氧化形成羟基蒽醌类化合物后才能呈色。

　6答案B

　考点醌类化合物的提取与分离★

　解析色谱法是系统分离羟基蒽醌类化合物的有效手段。分离游离羟基蒽醌衍生物时常用的吸附剂主要是硅胶，一般不用氧化铝，尤其不用碱性氧化铝，以避免与酸性的蒽醌类成分发生不可逆吸附而难以洗脱。

　7答案D

　考点实例——大黄所含主要蒽醌类化合物★★

　解析从大黄中提取分离游离羟基蒽醌时，可先用20%硫酸和苯的混合液，在水浴上回流水解并使游离蒽醌转入苯中。然后依次用5%碳酸氢钠、5%碳酸钠和05%氢氧化钠溶液萃取苯溶液，再分别酸化各种碱溶液并进行重结晶，结果从5%碳酸氢钠萃取液中得到大黄酸、从5%碳酸钠萃取液中得到大黄素、从05%氢氧化钠萃取液中得到芦荟大黄素。碱溶液萃取后的苯层，回收溶剂后进行硅胶柱色谱，分离得到大黄酚和大黄素甲醚。

　8答案B

　考点蒽醌类化合物的结构与分类★★★

　解析参见A型题第2题解析。

　9答案A

　考点实例——大黄所含主要蒽醌类化合物★★

　解析大黄的主要成分为蒽醌类化合物，其中游离的羟基蒽醌类化合物主要为大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酸等，大多数羟基蒽醌类化合物以苷的形式存在，还含有鞣质、脂肪酸及少量的土大黄苷和土大黄苷元。