HE染色操作流程是什么？

he染色的操作步骤：

将石蜡切片置于烘箱中60℃烤1～2h；

石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水，

苏木素染10分钟，

流水冲洗，去余色，

07%盐酸乙醇分化数秒钟，

流水冲洗，切片变蓝约15分钟，

795%乙醇30秒钟，

8酒精性伊红染30秒，

I 95%乙醇30秒钟，

II 95%乙醇30秒钟，

I 100%乙醇30秒钟，

II100%乙醇30秒钟，

石碳酸二甲苯30秒钟，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）

I二甲苯30秒钟，

II二甲苯30秒钟，

中性树胶封片。 

HE染色操作流程：

HE染色，即是苏木精-伊红染色法，是形态学最常用的染色方法，在质量较佳的HE染色切片上，各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

羽叶丁香种子采自陕西宁陕县。分别将羽叶丁香的种皮去除，用FAA固定，用番红——固绿染色，按常规石蜡切片法制成永久切片。

羽叶丁香种皮坚硬致密，故采用将种子用清水浸泡后，徒手制成切片进行观察。厚而坚硬、骨质，用软化剂处理无效，后用小钢锯在果皮中部，沿横向、径向和切向三个切面锯取小块果皮，用油石磨至约01mm，磨片呈半透明状，水洗后，番红染色，脱水，透明，加拿大树胶封片。组织化学成分鉴定用新鲜材料做徒手切片，试剂滴染显色反应来判定。羽叶丁香果实为蒴果，表面光滑，呈圆柱形，果长05-14m，先端钝，具小尖头，果内含有2-4枚种子。种子褐色，属双子叶有胚乳类型。长约8cm，背部有纵胁，纵剖面呈长梭形。胚长约占种子长的三分之二，为长棒状。

羽叶丁香种子的两片子叶、胚根、胚轴的形态建成虽已完成，但两子叶间生长锥呈凹陷状，说明胚芽形态并未完成形态建成，这或许是造成种子繁殖率低的一个因素。

种子的种皮、果皮结构及含有物直接影响着种子的萌发。羽叶丁香果为蒴果，成熟后开裂，种皮除最外一层紧密排列的柱状厚壁细胞层可能影响种子的透水、透气性，从而对种子萌发形成机械阻碍，是羽叶丁香种子繁殖率低的另一个因素外，其内侧多层薄壁或厚壁细胞由于其排列均呈疏松状，故不会成为种子萌发的障碍。华榛种皮虽极薄不会影响种子的萌发，但其果皮由呈柱状紧密排列的栅栏状石细胞层和多数近球形的、排列紧密整齐的厚壁细胞堆积层组成，因而具有高度的不透气、不透水性，难以满足胚正常生长所需的水、气条件；另外果皮中不同形态的石细胞彼此纵横交错，相互嵌合，形成坚固的机械实体，萌发的幼胚不能穿破果皮的机械障碍而萌发，这是造成华榛种子繁殖力低的主要原因。

GH4145镍基变形高温合金

一、GH145(GH4145) 概述

GH145合金主要是以γ′[Ni3(Al、Ti、Nb)]相进行时效强化的镍基高温合金，在980℃以下具有良好的耐腐蚀和抗氧化性能，800℃以下具有较高的强度，540℃以下具有较好的耐松弛性能，同时还具有良好的成形性能和焊接性能。该合金主要用于制造航空发动机在800℃以下工作并要求强度较高的耐腐蚀的环形件、结构件和螺栓等零件、在540℃以下工作的具有中等或较低应力并要求耐松弛的平面弹簧和螺旋弹簧。还可用于制造气轮机涡轮叶片等零件。可供应的品种有板材、带材、棒材、锻件、环形件、丝材和管材。

11 GH145(GH4145) 材料牌号  GH145(GH4145)

12 GH145(GH4145) 相近牌号 Inconel X-750(美国）,NiCr15Fe7TiAl(德 国),NC15FeTNbA(法国),NCF750 （日本）

13 GH145(GH4145) 材料的技术标准

14 GH145(GH4145) 化学成分  见表1-1。

    注：表中Mn、Si为棒、锻件、环形件和丝材含量，板材、带材和管材为：ω(Mn)≤035%,ω(Si)≤035%。

15 GH145(GH4145) 热处理制度 板、带、管材供应状态的固溶热处理制度980℃±15℃，空冷。材料及零件的中间热处理制度，可分别选择下列工艺进行热处理。

退火：955～1010℃，水冷。

焊接件焊接前退火：980℃，1h。

焊接件消除应力退火：900℃,保湿2h。

消除应力退火：885℃±15℃，24h,空冷。

16 GH145(GH4145) 品种规格与供应状态 可以供应各种规格的棒材、锻件、环形件、热轧板、冷轧板、带材、管材和丝材。

板材和带材一般于热轧或冷轧、退火或固溶、酸洗抛光后供应。

棒材、锻件和环形件可于锻态或热轧状态供应；也可于锻后固溶处理供应；棒材可于固溶后磨光或车光供应，当订单有要求时，可于冷拉状态就位。

管材于固溶处理并清除氧化皮后供应。

丝材可于固溶状态供应；对于标称直径或厚度在635mm以下的丝材，可固溶后并以50%～65%的冷拉变形供应；标称直径或边长大于635mm的丝材，固溶处理后以不小于30%的冷拉变形供应。对于标称直径或边长不大于065mm的丝材，根据要求固溶处理后以不小于15%的冷拉变形供应。

17 GH145(GH4145) 熔炼与铸造工艺 合金采用电弧炉加真空自耗重熔、真空感应加电渣、电渣加真空自耗重熔或真空感应加真空自耗重熔。

18 GH145(GH4145) 应用概况与特殊要求 该合金主要用于制造航空发动机工作温度在540℃以下的耐腐蚀的平面波形弹簧、周向螺旋弹簧、螺旋压簧、弹簧卡圈和密封圈等零件。

二、GH145(GH4145) 物理及化学性能    

21 GH145(GH4145) 热性能

211 GH145(GH4145)  熔化温度范围  1395～1425℃。

212 GH145(GH4145)  热导率  见表2-1。

213 GH145(GH4145) 线膨胀系数 见表2-2。

22 GH145(GH4145)密度  ρ=825g/cm3[7]。

23 GH145(GH4145)电性能  50℃时的电阻率ρ=122×10-6Ωm。  

 三、GH145(GH4145)力学性能

GH145(GH4145)技术标准规定的带材、板材和管材的室温力学性能见表3-1。

    注：交货状态为固溶980℃±15℃，保温适当时间，空冷或快冷，去除氧化皮。

GH145(GH4145)技术标准规定的丝材的室温力学性能见表3-2。

    注：交货状态，丝材在冷拉至成品前，在1090～1200℃内的某一温度固溶处理，然后按下述规定进行冷拉；

A类：标称直径或边长不大与635mm的丝材，冷拉变形量为50%～65%；标称直径或边长大于635mm的丝材，冷拉变形量为30%以上。

B类：标称直径或边长不大于065mm的丝材，冷拉变形量为15%左右。

GH145(GH4145)棒材、锻材和环形件标准规定的持久性能见表3-3。

四、GH145(GH4145) 组织结构

41 GH145(GH4145)相变温度 γ′相开始析出温度约为600℃，析出峰约为800℃，900℃开始回溶，到970℃时几乎全部溶解。

42 GH145(GH4145)时间-温度-组织转变曲线 

43 GH145(GH4145)合金组织结构 合金经标准热处理后，其组织由γ基体、Ti(C、N)、Nb(C、N)、M23C6碳化物和γ′[Ni3(Al、Ti、Nb)]相组成，γ′含量大约为145%，是合金的主要强化相。

五、 GH145(GH4145)工艺性能与要求

51 GH145(GH4145)成形性能 合金的锻造温度在1220～950℃之间均易成形。钢锭开坯锻造，其加热温度可在1200℃，为了使最终锻件或棒材获得良好的组织和性能，随后的锻造加热温度应在相应较低的温度下进行。终锻温度应不低于950℃。该合金在剧烈成形工序后应进行固溶处理。

52 GH145(GH4145)焊接性能 合金具有较好的焊接性能，可进行各种焊接，但对大截面的零件较难进行熔焊，而对小截面零件和薄板焊接性能较好。焊接必须在退火或固溶处理后进行，焊后应进行消除应力处理，采用980℃，保湿05h或900℃保湿2h。焊接组合件随后进行时效处理，可获得近似完全热处理状态的强度。

53 GH145(GH4145)零件热处理工艺 零件的热处理应在无硫的中性或还原性气氛中进行，以免发生硫化。零件应避免在870～650℃之间进行“热-冷”处理，对于大截面的零件，为了防止裂纹，固溶处理后应在空气中冷却。

成品零件最终热处理：

对于在600℃以上工作、要求最佳持久蠕变性能的零部件：

固溶：1150℃±15℃,保温2～4h,空冷；

时效：845℃±15℃，保温24h，空冷+705℃±15℃,保温24h,空冷。

对于在600℃以下工作、要求最佳室温和高温拉伸性能的零部件：

固溶：980℃±15℃,保温1h,空冷；

时效：730℃±15℃，保温8h，以50℃/h炉冷到620℃±10℃,保温8h,空冷。

环形件一般采用下述热处理制度：

固溶：1095℃±15℃,保温2-4h,空冷；

时效：845℃±15℃，保温24h，空或炉冷到+705℃±15℃,保温20h,空冷。

棒材和锻件在600℃以下温度使用时，采用下述制度进行热处理：

均匀化：885℃±15℃,保温24h,空冷；

时效：705℃±15℃，保温20±1h,空冷。

退火状态的板材和带材及做弹簧用的板带和丝材可采用下述制度进行热处理：

时效：1）705℃±15℃,保温22h,空冷；

2）760℃±10℃，保温1h,空冷。

固溶：980℃±15℃,保温1h,空冷；

时效：730℃±10℃，保温8h，以50℃/h炉冷到+620℃±10℃,保温8h,空冷。

54 GH145(GH4145)表面处理工艺

55 GH145(GH4145)切削加工与磨削性能 合金可以在各种状态下进行机械加工，退火或固溶状态下机械加工性能良好。

玻片用环保透明剂透明后，中性树胶封片出现雾状的原因有以下几点：

1、环保透明剂使用过多，导致封片后的透明度降低，产生雾状。

2、封片时中性树胶未充分搅拌均匀，导致树胶中的成分不均匀，产生雾状。

3、封片过程中温度过高，导致中性树胶的固化速度过快，产生雾状。

4、封片过程中加压不均匀，导致封片后的平整度不一致，产生雾状。

5、使用的中性树胶质量不好，导致封片后的透明度不高，产生雾状。

InconelX-750 (UNS NO7750)沉淀硬化型变形高温合金 镍基合金材料

InconelX-750特性及应用领域概述：

该合金主要是以γ'[Ni3(Al、Ti、Nb)]相进行时效强化的镍基高温合金，在980℃以下具有良好的耐腐蚀和搞氧化性能，800℃以下具有较高的强度，540℃以下具有较好的耐松弛性能，同时还具有良好的成形性能和焊接性能，该合金主要用于制造航空发动机在800℃以下工作并要求强度较高的耐腐蚀的环形件、结构件和螺栓等零件、在540℃以下工作的具有中等或较低应力并要求耐松弛的平面弹簧和螺旋弹簧。还可用于制造汽轮机涡轮叶片等零件。

InconelX-750相近牌号：

GH4145、 GH145(中国)、NCl5FeTNbA(法国)、WNr24669、 NiCr15Fe7TiAl(德国) 、NCF750(日本)

InconelX-750 金相组织结构：

该合金标准热处理状态的组织由γ基体、Ti(C、N)、Nb(C、N)、M23C6碳化物和γ'[Ni3(Al、Ti、Nb)]相组成，γ'含量大约为145%，是合金的主要强化相。

InconelX-750工艺性能与要求：

1、合金的锻造温度在1220～950℃之间均易成形。该合金在剧烈成形工序后就进行固溶处理。

2、该合金的晶粒度平均尺寸与锻件的变形程度、终锻温度密切相关。

3、合金具有较好的焊接性能，可进行各种焊接。焊接后进行时效处理可获得近似完全热处理状态的强度。

4、零件热处理就在无硫的中性或还原性气氛中进行，以免发生硫化

InconelX-750主要规格：

InconelX-750无缝管、InconelX-750钢板、InconelX-750圆钢、InconelX-750锻件、InconelX-750法兰、InconelX-750圆环、InconelX-750焊管、InconelX-750钢带、InconelX-750直条、InconelX-750丝材及配套焊材、InconelX-750圆饼、InconelX-750扁钢、InconelX-750六角棒、InconelX-750大小头、InconelX-750弯头、InconelX-750三通、InconelX-750加工件、InconelX-750螺栓螺母、InconelX-750紧固件

篇幅有限，如需更多更详细介绍，欢迎咨询了解。

一、包埋实验器材和试剂

1、试剂

酒精、苯醇、二甲苯、苯蜡、 纯蜡。

2、器材

镊子、解剖刀、解剖剪、包埋盒、洗脱瓶、酒精灯、冰、切片机、烘片机、浸蜡瓶。

二、步骤

1取材

将舌鳎性腺从酒精中取出放在实验台上，用镊子夹住性腺的一端进行横切，取材长度2-3mm，放入包埋盒中脱水。注意编号

2脱水

将包埋盒放入盛有酒精的洗脱瓶中按酒精浓度梯度脱水 

70%酒精（45min/1h）→80%酒精（45min/1h）→90%酒精（45min/1h）→100%酒精（40min）

3透明

1:1苯醇（40min) →二甲苯（30min） 

4 浸蜡（恒温箱62℃、1天）

1:1苯蜡（45min/1h）→纯蜡1（45min/1h）→纯蜡2（45min/1h）

包埋时间表：

步骤：

70%酒精（45min/1h）→ 80%酒精（45min/1h）→90%酒精（45min/1h）  → 100%酒精（40min）→ 1:1苯醇（40min)  → 二甲苯（30min）→  1:1苯蜡（45min/1h） → 纯蜡1（45min/1h）→纯蜡2（45min/1h）

5包埋

用加热的镊子将材料放入包埋盒中，横切面向下，倒入熔融的石蜡，用加热的镊子迅速将材料按所需的切面摆放整齐，待包埋盒表面的石蜡凝固后将包埋盒平放入冰中，使石蜡迅速凝固。最后从包埋盒中取出蜡块，以便保存。将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。

6修块

将已包埋好的含有包埋材料的蜡块用单面刀切成梯形小块，并可粗视到材料切面

7切片

用切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时先把切片刀夹在刀架上，再把载蜡器夹在固定装置上（注意安装切刀的角度，刀口运行方向与材料切面平行），然后调整好所需厚度，5微米，转动切片机切片。

8粘片

切下来的切片经过目检，将符合要求的切片粘在洁净的载玻片上。粘片时先在载玻片上涂上少量甘油蛋白（可用蛋青和甘油各50ml，加1g 水杨酸混合而成），加几滴蒸馏水，然后用镊子小心把切片放在水上，在40℃下，用拨针将切片伸直、展平，并烘干。

9染色

见染色流程

切片染色流程

1、二甲苯Ⅰ        15min   

2、二甲苯Ⅱ        15min

3、1:1苯醇          5min

4、无水乙醇          2min

5、90%乙醇          2min

6、80%乙醇          2min

7、70%乙醇          2min

8、50乙醇            2min

9、30%乙醇          2min

10、自来水          2min

11、蒸馏水          2min

12、苏木素          10min

13、自来水          5min

14、蒸馏水          2min

15、盐酸分化液      5s

16、自来水          10min

17、蒸馏水          2min

18、30%乙醇        2min

19、50乙醇          2min

20、70%乙醇        2min

21、80%乙醇        2min

22、伊红            40s

23、90%乙醇        2min

24、95%乙醇        2min

25、无水乙醇Ⅰ      2min

26、无水乙醇Ⅱ      2min

27、1：1苯醇        2min

28、二甲苯Ⅰ        5min 

29、二甲苯Ⅰ        5min

10树胶封片、镜检、保存

附：

· 固定的目的

1迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。

2使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。

3使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。

4使组织块硬化，从而在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。

5使组织成分对染料有不同的亲和力，经过染色处理后易于辨认。

6防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。

· 固定的注意事项及影响因素

1固定液的用量

应充足，一般为组织块体积的10-20倍左右。瓶底垫上脱脂棉或几层滤纸更好。以便固定液能从上下左右前后渗入组织块。软组织或较大块组织可以经2-3小时固定后，再修整成小块重新投入新配制的固定液内继续固定。

2固定时间

应根据组织的种类、性质、大小，……渗透力的强弱而定。

如：一般组织，以10%福尔马林固定24h……

适当地增加温度可缩短固定时间。

· 常用固定液：

固定液特点：

①有较强的渗透力，能迅速的渗入组织内部；

②不使组织过度收缩或膨胀，并能使组织内待观察的成分凝固因为不溶性物质；

③能使组织达到一定的硬度并获得较佳的折光率和对某种染料具有较强的亲和力。

（1）单纯固定液

甲醛    10ml

蒸馏水  90ml

优点：渗透能力强，固定均匀，组织收缩小。

缺点：但经乙醇脱水后收缩较大。

· 酒精脱水注意事项 ：

1一般从70%酒精开始，由低浓度到高浓度逐步处理，如果固定液为酒精溶液，那就从与固定液中相同浓度的酒精开始脱水。

2对一些柔软组织，如胚胎组织，应从70%酒精以下50%或30%开始脱水。

3脱水的时间根据组织的种类、体积大小和厚度而定，一般与组织的大小成正比。

脱水必须在有盖瓶子内进行，特别是高浓度酒精。

脱水兼透明脱水剂：脱水后直接可以浸蜡

10玻片的清洗

新的载、盖玻片：必须经清洁液处理后方能使用，方法是先用自来水冲洗或洗衣粉擦拭冲洗后，再入清洁液浸泡一天以上，取出经清水冲洗，转入95%酒精内浸泡脱脂后，用干净的棉布及绸布擦干备用，一般玻璃仪器可放入干燥箱内烤干备用。

经染色并封片后的载玻片：可先在酒精灯上加温以除去或放入大量废二甲苯浸泡一周左右，盖玻片即能与载玻片自然分离，然后投入碱皂水中煮沸，用自来水冲洗后，按新玻片处理法处理。

浸蜡步骤：

1:1二甲苯和石蜡(30-45min)→石蜡(30-45min)→石蜡(30min)

包埋步骤：

    将熔化好的石蜡倒入包埋组或包埋盒，用加温的镊子将组织块切面朝下放入，做好标记，冷却，完全凝固后，修整蜡块。

包埋温度：与浸蜡温度接近或高2℃左右。

冰冻组织的取材，就是选择好合适的组织块，放在一个小的金属托上进行速冻，冻到一定的硬度后，就在病理切片机进行切片。然后将切片放入酒精或者专有的固定液里固定，最后进行相应的染色及封片。再盖上盖玻片，贴上病理号标签，这样一张冰冻切片就制作完成了。