MTT、CCK8法
技术原理： MTT是3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide的简称，商品名为噻唑蓝。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。然后采用二甲基亚砜（DMSO）溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在570 nm波长处测定其光吸收值，反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
CCK8法原理是WST-8四唑盐（2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium）能被活细胞内的脱氢酶还原成橙色甲臜染料，然后测定450 nm下的吸光值，生成的甲臜的量与活细胞数量成正比。CCK8法可以做6天左右的生长曲线，1-6天每天收取细胞样本检测。也可以类似MTT法，在相同时间比较不同处理组。
BrdU、EdU法
技术原理： BrdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，可以代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，这种置换可以稳定存在，并传递到子细胞中。细胞经固定和变性处理后，可以用免疫学方法检测DNA中的BrdU的含量，从而判断细胞的增殖能力。
EdU也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖过程中代替胸腺嘧啶插入正在复制的DNA中。EdU与荧光染料可以特异性地反应检测DNA的复制。
CFSE检测
技术原理： 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺酯基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团。CFSE被细胞吸收后，不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到蛋白质上。随着细胞增殖分裂，细胞内CFSE的含量被平均分配到两个子细胞中，子细胞荧光强度减半。随着细胞的增殖，CFSE不断被稀释，使用流式细胞仪对CFSE进行检测，可以对细胞的增殖进行分析。
免疫组化检测
技术原理： 使用免疫组化的方法对细胞增殖相关抗原-Ki-67、PCNA进行检测。这类标志物只表达在增殖细胞中，常用于反映体内肿瘤细胞的增殖能力。
细胞克隆形成
技术原理： 细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等的重要技术方法。当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在03-10 mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测，细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。
细胞迁移
Transwell检测
技术原理： 细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。
Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内，由于膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
细胞侵袭
Transwell检测
技术原理： 细胞侵袭是指细胞向局部侵犯，细胞侵袭实验可用来研究细胞和胞外基质之间的相互作用。胞外基质不仅为细胞提供了结构支架，同时也包含了许多细胞生存及生长过程中生物功能因子。细胞可以分泌酶，用于降解胞外基质中特定的组分，从而使细胞可以在细胞间质中移动。胞外基质胶模仿体内细胞外基质胞外基质环境，包含了支撑细胞结构的最基本的组分。转移性肿瘤细胞由于其高迁移和/或降解胞外基质的酶活从而表现出较强的侵袭性。
铺有 Matrigel 胶的 Transwell 小室可用于检测细胞侵袭能力。Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以铺有 Matrigel 胶聚碳酸酯膜相隔，Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。滤膜孔径一般为8 μm，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。铺有Martrigel的滤膜放在以细胞小室上下室之间，铺有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趋化剂，上室加入重悬的瘤细胞，具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动。肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与它的体内侵袭转移能力表现出较好的相关性，可以用重建基质膜模型初筛抗侵袭药物。
细胞凋亡
Annexin V-PI双染色流式检测
技术原理： 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinV是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸（PS）有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的胞膜结合。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，通过流式细胞仪检测可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
Caspase3活性检测
技术原理： Caspase3是细胞凋亡最重要的执行蛋白之一，对其功能/活性的检测可以反映细胞的凋亡情况。可以使用Western Blot检测细胞中Caspase3蛋白的表达水平或者使用流式细胞仪检测细胞群体中Caspase3阳性细胞的比例。
细胞周期
PI（碘化丙啶）染色
技术原理： 细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即 DNA 合成前期 ( G1 期 )、DNA 合成期 ( S 期 ) 与 DNA 合成后期 ( G2 期 )。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能 ( G0 期 )。由于细胞周期各时相的 DNA 含量不同，通常正常细胞的 G1 / G0 期具有二倍体细胞的 DNA 含量 ( 2N )，而 G2 / M 期具有四倍体细胞的 DNA 含量 (4N)，而 S 期的 DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与 DNA 结合，其荧光强度直接反映了细胞内 DNA含量。因此，通过流式细胞仪 PI 染色法对细胞内 DNA 含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为 G1 / G0 期，S 期和 G2 / M期，获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
�0�1 Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342。分子式为C27H28N6O�6�13HCl�6�13H2O，分子量为61599，CAS Number 23491-52-3。
�0�1 Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
�0�1 Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
�0�1 Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。
�0�1 Hoechst 33342溶于水，溶解度可达20mg/ml。
�0�1 用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33342工作浓度为05-10微克/毫升。
荧光染料Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。而PI染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI染料染色。根据这些特性，用Hoechst 33342结合PI染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst 33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst 33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst 33342+/PI++）。
使用说明：
1对于固定的细胞或组织：
a对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
b对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
2对于活细胞或组织：
a加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。
b在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
希儿带什么仪器？
1 希儿使用的主要仪器
在生命科学研究领域，希儿（CRISPR）技术是非常重要的一种基因编辑技术。它被广泛应用于研究基因功能、治疗疾病和创造转基因生物等领域。因此，在研究中，希儿科技需要使用一些特殊的、高质量的实验仪器来支持其研究。主要的仪器包括PCR仪、电泳仪、流式细胞仪和高通量测序仪等。
2 PCR仪
PCR仪（聚合酶链反应）是一种将DNA序列扩增至数目百万级以供分析的重要仪器。在希儿技术研究中，PCR仪通常用于放大特定片段的DNA序列以进行后续操作，包括酶切、克隆以及测序等。PCR扩增所需的反应体系非常精密，实验中需要严格控制反应体系的温度、反应时间、反应物品质等各个方面条件。
3 电泳仪
电泳仪是可视化分析DNA序列的重要实验仪器之一。在希儿技术研究中，DNA通常需要在电泳仪中分离，以便进行下一步的操作，例如对基因进行检测和编辑。电泳仪具有高灵敏度和高分辨率的特点，能够对DNA分子进行准确的分离和检测。除此之外，电泳仪还可以使用不同的染料和标记来检测和分析DNA的数量以及特定的DNA序列。
4 流式细胞仪
流式细胞仪是一种高级技术，用于快速检测和分析细胞的数量、类别和功能。在希儿技术研究中，流式细胞仪可以用于分析希儿蛋白与RNA的组合对基因表达的影响。流式细胞仪还可以对细胞进行分类、亚群分析以及细胞活力检测等多种实验操作。流式细胞仪具有高通量、精度高和重复性强等优点，被广泛应用在生命科学研究中。
5 高通量测序仪
高通量测序仪（英语：High-Throughput Sequencing）是一种可快速测序高质量基因组序列的技术，可以将测序操作自动化，提高实验效率和准确性。在希儿技术研究中，高通量测序仪可以用于检测希儿蛋白与RNA的交互、筛选基因编辑的有效性以及检测不同细胞系的基因表达差异性等。作为一项核心的高通量测序技术，它在基因组学、转录组学和表观遗传学等领域的应用逐渐扩展。
6 结论
希儿技术是生命科学领域中一项非常重要的基因编辑技术。在希儿技术的研究中，PCR仪、电泳仪、流式细胞仪和高通量测序仪等成为必须使用的仪器。这些仪器通过提高实验效率、精度和准确性等方面，帮助科学家更好地理解基因的功能和遗传变异，为基因治疗和生命科学研究做出重要贡献。
线粒体活性氧 mitosox 细胞
活性氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物（compound mixture），浓度为50mg/ml。
一、注意事项
1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。
3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
二、使用说明
1、装载探针
对于刺激时间较短（通常为2小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激
时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
2、检测
对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。
3、参数设置
使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测DCF。
4、其它说明
阳性对照可以按照1：1000的比例使用。例如装载好探针的细胞共1毫升，可以加入1微升的阳性对照刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
另外，对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1：2000-1：5000稀释DCFH-DA，使装载探针时DCFH-DA的浓度为2-5微摩尔/升。探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。
PTEN基因在T-ALL细胞株JURKAT中的作用以及对NOTCH1、c-MYC基因调控机制研究目的：T淋巴细胞自血病(T-ALL)是是来源于T淋巴细胞的恶性克隆性肿瘤,发病率约占儿童ALL的10[％]-15[％],占成人ALL的25[％]T-ALL的发病机制常涉及造血前体细胞的遗传基因的改变,导致细胞周期调节紊乱,成熟分化受阻,自我复制增殖过度,凋亡受抑等有关在近年的临床治疗中,T-ALL患者的缓解率和长期生存得到了显著改善,但仍有30％的病人存在复发和预后不良现象因此,深入研究T-ALL的发病机制,探索新的治疗靶位仍有重要意义PTEN是第一个发现的具有双特异性磷酸酶活性的肿瘤抑制基因,其主要功能是作为脂质磷酸酶使三磷酸-磷脂酰肌醇(PIP3)脱磷酸化,转化为二磷酸-磷脂酰肌醇(PIP2)PTEN则通过降低PIP3的量而成为PI3K/AKT信号通路最重要的负调控因子,逆转PI3K的作用,从而引起其下游的一系列信号分子的变化,使细胞周期停滞于G1期,抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡目前研究表明,无论是在实体瘤还是在造血系统恶性肿瘤中,均存在PTEN功能的缺失T-ALL中PTEN的作用近来也引起重视,但具体机制尚不清楚Notch信号通路影响造血细胞增殖与分化、凋亡多个过程中,其中Notch1在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节T-ALL中Notch1的突变和异常活化是近来研究的热点,是T-ALL中可能发展的靶向治疗靶点PTEN和Notch1均与T-ALL的发生发展密切相关,但具体作用机制及其在疾病中的相互作用有待于进一步阐明在T-ALL中存在Notch1的突变缺失,最终导致Notch信号转导通路的过度激活,促进T细胞发育,阻碍B细胞的发育,从而导致T淋巴细胞瘤的形成Notch信号转导通路的激活主要从以下两方面导致肿瘤形成：1、诱导原癌基因C-myc的过表达；2、持续激活P13K/AKT等抗凋亡信号通路但对于频繁的GSI(Notch信号通路抑制剂)耐药问题的研究发现,PTEN基因缺失可能是主要原因,因此NOTCH1与PTEN在肿瘤发生发展中是否存在相互的调控机制有待进一步研究而c-myc是NOTCH信号通路下游一重要分子,又作为原癌基因在许多肿瘤中都存在过表达,降低或阻断其过表达能够抑制肿瘤细胞的生长并促进其凋亡,但其触发T-ALL发生发展的机制尚未明确,但是可能作为连接PTEN/AKT与NOTCH1的桥梁而对白血病提供靶向治疗本研究旨在于通过构建PTEN基因高表达载体,研究PTEN基因对T-ALL细胞系JURKAT增殖凋亡的影响,初步阐明其机制；检测转染PTEN基因前后T-ALL相关基因NOTCH1、C-MYC表达的变化,进一步研究PTEN与C-MYC在白血病发生发展中的相互作用,治愈白血病提供实验依据方法：将携带有野生型PTEN基因及编码绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)和仅携带有编码绿色荧光蛋白基因的空载体腺病毒(Ad-GFP)分别转染人T淋巴细胞白血病细胞株JURKAT细胞；流式细胞仪检测细胞凋亡情况MTT法检测细胞生长抑制率反转录PCR(RT-PCR)检测转染前后PTEN、MYC、NOTCH1mRNA表达水平变化结果：1本实验成功构建了PTEN基因高表达载体,应用携带有野生型PTEN基因及编码绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-PTENGFP)转染JURKAT细胞系2转染JURKAT细胞48h后,提取RNA,RT-PCR方法检测转染PTEN基因后JURKAT细胞中PTEN呈高效表达,表明转染成功；3转染野生型PTEN基因的JURKAT细胞表现为增殖明显受抑,与转染空载体组和未转染组比较有统计学意义(P＜005),而后两组之间差别无统计学意义(P＞005)；4转染野生型PTEN基因的JURKAT细胞表现为凋亡增多,与转染空载体组和未转染组比较有统计学意义(P＜005),而后两组之间差别无统计学意义(P＞005)；5转染野生型PTEN基因的JURKAT细胞显示细胞凋亡率随药物浓度NOTCH1、c-MYCmRNA表达水平则明显低于转染空载体组和未转染组(P＜005),且后两者下降有相关性(P＜005)结论：1本实验应用携带有野生型PTEN基因及编码绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)转染JURKAT细胞系,明显抑制人T淋巴白血病细胞系JURKAT细胞增殖,促进细胞凋亡,表明通过抑制PI3K/AKT信号通路,可抑制T-ALL细胞生长、诱导细胞凋亡2PTEN基因高表达使NOTCH1表达下调,使C-MYCmRNA水平下调,两者的下调具有相关性表明PTEN/PI3K/AKT信号通路
会。根据查询百科网显示，骨髓细胞的单细胞悬液，会堵塞流式细胞仪。流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置，可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量。
DCF应该指的是测量细胞内活性氧ROS含量的一个检测试剂，2’，7’__dichlorodihydrofluorescein。
CM-H2DCFDA在细胞内水解成DCFH，DCFH被胞内的氧化剂氧化成高荧光强度的DCF，用于检测ROS_的生成。通过流式细胞仪测定细胞内DCF的荧光强度，即可对单个细胞为基础的细胞内ROS进行原位实时检测，根据DCF荧光强度直接反映细胞内自由基的变化程度。
而MFI就是平均荧光强度（Mean fluorescence intensity），用于表示某个指标的流式检测最终的荧光强度，可根据MFI值的大小，表示本问题中DCF的含量，即ROS的水平。
：
一、资金流量指标（MFI，英文全名Money Flow Index）是相对强弱指标（RSI）和人气指标（OBV）两者的结合。MFI指标可以用于测度交易量的动量和投资兴趣，而交易量的变化为股价未来的变化提供了线索，所以MFI指标可以帮助判断股票价格变化的趋势。
二、应用法则
1显示超买超卖是MFI指标最基本的功能。当MFI>80时为超买，在其回头向下跌破80时，为短线卖出时机。
2当MFI3当MFI>80，而产生背离现象时，视为卖出信号。
4当MFI注意要点
1经过长期测试，MFI指标的背离讯号更能忠实的反应股价的反转现象。一次完整的波段行情，至少都会维持一定相当的时间，反转点出现的次数并不会太多。
2将MFI指标的参数设定为14天时，其背离讯号产生的时机，大致上都能和股价的顶点吻合。因此在使用MFI指标时，参数设定方面应尽量维持14日的原则。
熔融流动指数:MFI，无纺布熔融喷丝中常用参数。
三、战斗机
MFI——俄罗斯新型多用途战斗机
又称米格142战斗机
MFI为重型单座战斗机，“鸭翼”式气动布局，带有全动式鸭翼（这是该机重要 特征之一），中置三角机翼和v型尾翼；机翼与机身有机融合，前机身横截面呈三角形状，机翼大边条延伸至机头；双垂尾稍向外倾，翼尖略下垂，机头下倾，可使飞行员有良好的视界。这是俄罗斯在设计喷气式飞机时首次运用鸭式气动布局。MFI的气动外形和结构与歼击机有较大的区别。如普通歼击机上有水平尾翼、垂直尾翼上的方向舵和襟翼，而MFI上这种可调翼面达16个之多。飞机可对各种飞行状态和飞行条件做出反应，使其像小鸟一样地飞行。所有这一切都是借助于电脑成的，给飞行员剩下的只有像普通飞机上的驾驶杆。同时，MFI在开始研制时就确定，未来可作为舰载多用途歼击机使用。
一、形态学观察方法
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
二、DNA凝胶电泳
（一）检测原理
细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
（二）结果判断
正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER）条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定
凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。
（一）检测步骤
1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；
2、在微定量板上吸附组蛋白体；
3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合；
4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合；
5、加酶的底物，测光吸收制。
（二）用途
该法敏感性高，可检测5100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。
四、流式细胞仪分析
（一）检测原理
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。
（二）应用价值
流式细胞仪检测具有以下特点：
1）、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确
2）、可以做许多相关性分析
3）、结合被检测细胞的DNA含量的分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期
■检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性液增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
利用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有抗拒性，荧光染色很浅，凋亡细胞主要摄取Hoecha染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI）而呈强的红色荧光。
■DNA片断原位标记法
凋亡细胞DNA片断原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，DUTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3的羟基（－OH）端结合，经显色反应后检测DNA裂解点的技术。
DNA片段原位标记法有二种：
1、原位缺口转移（in situ nick-translation，ISNT）技术，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸连接到断裂DNA的3－OH端
2、原位缺口末端标记技术（in situ end labelling technique，ISEL），即TUNEL法，它是利用TdT将标记的DUPT接到3－OH端。研究证明，TUNEL法的敏感性远高于ISNT，尤其对早期凋亡的检测，TUNEL为合适。
■检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法
1、原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V（Annexin V）是钙依赖性的磷脂结合蛋白，它于PS具有高度的结合力。因此，Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V，将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），同时结合使用PI拒染法（因坏死细胞PS亦暴露于细胞膜外测，且对PI高染）进行凋亡细胞双染法后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。
2、结果判断：正常活细胞Annexin V 、PI均低染；凋亡细胞Annexin V高染、PI低染；坏死细胞Annexin V/PI均高染。
3、应用价值：细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。又Annexin V联合PI染色不需固定细胞，可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此，Annexin V联合PI法更加省时，结果更为可靠，是最为理想的检测细胞凋亡的方法。
欢迎分享，转载请注明来源：品搜搜测评网
微信扫一扫
支付宝扫一扫
