wb实验的原理和步骤

WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。

再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。

扩展资料：

WB，蛋白质印迹（Western blotting）又称免疫印迹（immunoblotting）,是采用印迹技术将蛋白质转移到膜上，再根据抗原-抗体的特异性结合，检测复杂样品中的某种蛋白的方法，该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

一、蛋白样本提取制备

1 细胞或组织裂解

2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂

3 蛋白定量

4 电泳上样样品的准备

二、 电泳

1 PAGE 胶的制备

2 蛋白分子量 Marker

3 阳性对照

4 内参对照

5 上样与电泳

三、 转膜与显色（ Western Blot）

1 胶中蛋白的检测

2 蛋白转膜

3 膜上蛋白的检测：丽春红

4 膜的封闭

5 一抗的孵育

6 二抗的孵育

7 显色

四、常见问题分析与解决方案

五、试剂及缓冲液配方

一、蛋白样本提取制备

蛋白样品制备是 Western Blotting 的第一步，是决定 WB 成败的关键步骤之一。

蛋白提取总体原则与注意事项包括：

1) 尽可能提取完全或降低样本复杂度使得集中于提取目的蛋白（通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品）。

2) 保证蛋白处于可以溶解状态（通过裂解液的pH 、盐浓度、 表面活性剂、还原剂等的选择实现）。

3) 提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（全程保证在冰盒中低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。

4) 尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）。

5) 样品分装，长期于-80℃中保存，避免反复冻融。

冰箱除臭法

电冰箱用久了，就会出现难闻的怪味，除了用除臭剂除味或及时清洗冰箱以外，可用下列简便方法除味。

一、蒸馒头时剩一小块生面在碗中，置于冰箱冷藏室上层，可使冰箱2～3个月内没有异味。

二、用纱布包50克茶叶放入冰箱，一个月后取出放在太阳下曝晒，再装入纱布放进冰箱，反复使用。

三、用一条干净纯棉毛巾，折叠整齐放冰箱上层网架边，毛巾上的微细孔可吸附冰箱中的气味，过段时间将毛巾取出用温水洗净，晒干后又可使用。

四、将几块新鲜的桔子皮洗净揩干，散放入 冰箱内，其清香味亦可趋解除怪味。

五、如果家中是用炉子，可将燃烧过的蜂窝煤完整地取出，放入冰箱内（为了使冰箱内干净，可将其置于一盘内），放置一两天后即可去异味。

自制灭蟑药的方法

取一些面粉、硼酸、洋葱、牛奶作原料。把洋葱切碎，挤压取汁，把它一点一点加入同量的面粉和硼酸里，再添加一点牛奶，用手揉成直径约1厘米的小团子，放在蟑螂经常出没的菜橱、厨房角落等处，只要蟑螂咬一口就会被毒死。如放几天后，硼酸团子变硬，但效果不变。需要注意的是，毒饵不要让小孩、畜禽误吃。

家居清洁五大祛味法

1、300克红茶泡热茶两脸盆水，放入居室中，并开窗透气，48小时内室内甲醛含量将下降90%以上，刺激性气味基本消除。

2、购买800克颗粒状活性碳除甲醛。将活性碳分成8份，放入盘碟中，每屋放两至三碟，72小时可基本除尽室内异味。

3、准备400克煤灰，用脸盆分装后放入需除甲醛的室内，一周内可使甲醛含量下降到安全范围内。以上方法同样适用于装修完没有异味的家庭，毕竟有些有害物是无色无味的，多一分清洁，就多一分安全。

4、把泡过的茶叶，放在冰箱内部，即可达到除臭作用。若是没有茶叶，也可将柠檬或柳丁切开，只要半小块便能达到功效。此外，以沾有啤酒的抹布擦拭冰箱内部，异味也会无所遁形。

5、在家庭的卫生间里摆放绿色植物，可以达到调节空气，消除异味的功效。最好在窗口养上一盆绿植，或者放上花瓶，插三五朵花，可以带来清新怡人的感觉。

去除家中粉尘

装修设计不合理，再清洁的家也免不了有粉尘堆积的死角，其实将清洁和设计结合就可以将家中的尘埃一网打尽。

粉尘堆积最为普遍是家中卧室的床下、书房的电脑桌下等闲置的又不经常使用的空间。实际上在设计家中空间时，你完全可以对它们进行利用和处理。比如，让床下变成一个储物的空间，让移动的储物盒子提示你，每周不忘清理。在书房，将书桌、书柜组合尽量开放化，使用墩布可以轻松地清洁。

同样的问题，对于高高挂起的吊灯和吊顶实在是难题。你可以尽量选择可拉伸高度的吊灯，而家中的吊顶则不宜设计得过于复杂，深度也不宜过深，这样擦拭清洁更方便。接触尘埃的门窗，应既具有灵活的可拆卸和开关的设计，还应保证足够结实，以利长期的清洁灰尘之用。

家居消毒小贴士

如何清洁消毒家居，减少细菌滋生和传播也是人们一直关注的话题。而为预防疾病，防患于未然，在日常生活中，对家居环境和物品定期进行消毒，及时消除生活环境中的有害微生物，是确保生活质量和人身健康的妙法。那么家居常用的简易消毒方法有哪些呢？市面上令人眼花缭乱的消毒清洁用品在使用的过程中又要注意那些细节呢？以下将一一道来。

高温消毒

高温消毒法是通过沸水高温来杀死一般的致病菌，餐具、婴儿用品等的消毒都适用。高温消毒法操作简单，消毒时间需从水沸后开始计算，将需要消毒的物品放置在沸水中约15~20分钟即可。

日光杀菌

日光中含有紫外线和红外线，据了解，照射3~6小时就能够达到一般消毒要求。碰到秋高气爽，阳光灿烂的天气，把家里存放了多月的被褥、衣服挪到太阳下暴晒就可以达到消毒的目的。而且经过阳光的暴晒，被褥、衣服里的霉味会一扫而空，还带着一种阳光的温暖感觉。此外，经常开窗换气通风，可以有效减少室内的病菌浓度，保持空气清新。这些都是常用的简易消毒方法。

洗涤消毒

市面上的不少消毒用品具有杀菌彻底、杀菌速度快、使用方便的特点。根据用途，这些产品大致可以分为衣物清洁用品、蔬果清洁用品、厨卫清洁用品、墙地清洁用品几大类，其成分结构各有不同。在使用这类消毒用品时应先看清楚使用说明，在有关的指引下正确使用，否则反而会造成不必要的伤害。

家具清洁

例如，常用的漂白水，虽然它的消毒功效颇为显著，但所挥发出来的味道较浓，且稀释份量控制不当，其中所含的毒性可能会对抵抗力较弱的小孩造成伤害。漂白水也会损害家具的表面，导致褪色，所以漂白水用于消毒地板比较适合。使用时注意其稀释度，家用漂白水作消毒时，漂白水跟清水的比例应根据使用说明正确调配。

蔬果清洁

而一些专用于洗涤蔬菜、水果、餐具的洗涤剂，物体浸泡其中的时间不能过长，洗后要用流水冲洗干净。家庭不可缺少的洗衣粉的使用也需要注意，由于洗衣粉具有较强的去污性，能把人体的油脂洗掉，引起皮肤干燥，部分人有刺痛的感觉和其他过敏症状，所以一次使用洗衣粉不宜过多，更不能用来洗头、洗澡。

值得提醒的还有，使用任何一类清洁用品时，都不要将两种或两种以上的产品混合使用，以免产生化学反应。

巧除污渍异味

新华网贵州频道9月8日电�新装修的家居总会遇到各种各样的小问题,房子住久了里面的装饰也会出现一些尴尬的情况。这里就教你一些小窍门去处理。

巧除油漆味 油饰一新的墙壁或地板,往往散发出一股刺鼻的油漆味,可以在室内放两盆盐水,油漆味会很快消除。如果是木器家具散发出的油漆味,可以用茶水擦洗几遍

。

拭除沙发食物渍 布面沙发被食物污染,要立即清除。如果被果汁、茶等污染,先用纸巾吸去水分,然后用中性洗涤液抹拭,最后用清水擦净。

防止墙面泛黄 下面两法不妨一试:一是将墙面先刷一遍,然后刷地板,等地板干透后,再在原先的墙面上刷一层,确保墙壁雪白。另一种方法是先将地板漆完,完全干透后再刷墙面。要注意的是,刷完墙面和地板后,一定要通风透气。

木地板去污 地板上有了污垢,可用加了少量乙醇的弱碱性洗涤液混合拭除。应先用抹布蘸少量混合液涂于污垢处,用湿抹布拭净。若木地板没有变色,便可放心使用。

新居植物选净化功能

新房装修好，该买的家具、电器也置办齐了，趁春光明朗，到花卉市场逛逛，搬一些有净化功能的植物回家。听听玉泉营花卉诊所专家的建议，家要美丽更要健康。

　　新居植物选净化功能

　　新装修的房间或多或少都会有些异味，可选择一些植物作天然的净化器。据玉泉营花卉诊所的专家介绍，一盆叫“折别鹤”的吊兰就可充当8至10平方米房间的“空气净化器”；还有一种平安树（肉桂），自身能释放出清新的气体，让人精神愉悦；天竺葵、秋海棠等能吸收空气中的过氧化氢；虎皮兰、芦荟是空气中甲醇的克星；金橘、石榴等可以吞噬空气中的氟；常春藤有减轻苯污染的功能；米兰、红背桂、山茶、菊花等具有较强的吸收、过滤的作用；龟背竹、百合、仙人掌、竹子等吸收有害气体的能力也很强。

　　花花草草虽然好，但也要注意不要放太多在卧室。因为绿色植物在光照不足的情况下会和人一样的吸入氧气，排出二氧化碳，如果再加上空气流通不畅而造成二氧化碳浓度过高，是会影响人体健康的。

　　购买时要察“叶”观色

　　观叶植物主要分为木本观叶、草本观叶、吊盆类及蕨类植物等，从整体看，株形青翠健壮、整齐、不散不乱；叶片上应无病斑、虫害、黄化、折损、断裂，枝叶茂盛；叶色需光洁、明亮。

　　观花植物，则以选择花带蕾的为佳。玫瑰类要选叶直挺、叶片平坦、鲜绿有光泽；花朵无弯折、花瓣厚实、花苞部位扎实有弹性的；选择多朵的百合时，最好已有1至2朵开放，其余的花苞充实饱满、枝叶色泽鲜绿的；健康的蝴蝶兰花瓣较厚挺、扎密，每枝上有6至8朵蓓蕾，花梗挺直、花序整齐、花型圆满，无内卷、褪色、透明为好。

卫生间泛味的几个原因

大部分原因是地漏反味。

卫生间泛味几个原因大致如下：

1，返水弯没有及时存水，长时间不用水蒸发掉了。

2：下水管系统压力不平衡（顶出屋面透气管堵塞），别人排水时把返水弯寸水“抽”走了。

3：地楼返水弯设计不好，存不住水或存水太少达不到封闭作用。

4：后排水坐便器的橡胶管有裂缝。现在的橡胶管质量非常成问题，距离不合适，橡胶管折弯过死，很快就开裂。

5：装修时改造了洗脸盆等下水位置，而下水立管又没有做折反头（存水弯）。

6：卫生间排气道倒灌。可能是上部堵塞或截面设计不合理。

排除法找到原因再对应措施解决问题。

如果没有冰箱，可以采取以下方法来尽可能地保持药品的质量：

1 避光：药品中的某些成分可能会在光照下发生结构改变，影响药效。因此，要避免药品放置在直接暴晒处，如窗边、阳台等，可以放在避光盒或棕色瓶中，置于家中暗处储存。

2 防潮：有些药物会吸收空气中的水分，使药品水解或性状发生改变。此类药物可放置在单独的密闭的药品储存盒里，用后塞紧瓶盖，存放于干燥的地方，如卧室、客厅等，避免放在卫生间等湿度大的房间。

3 冷藏：如果药品说明书上注明需要低温储存，可以尝试到超市或药店购买冰袋，用毛巾包裹好，然后再放置在药品旁边。如果没有冰箱，可以购买泡沫箱或冰盒，将冰袋放置在药品和冰盒之间，以确保药品温度稳定。同时，要避免将药品遗忘在车中，特别是在夏季阳光强烈时。

您好！

1冰箱温度并不均匀，如果姆潘巴将其冰盒正巧放在冷却管附近，甚至与冷却管相接触，完全有可能热牛奶比冷牛奶先结冰；

2如果姆潘巴不喜欢吃甜，在冰淇淋中少放了糖，或者因为匆忙没来得及搅拌、糖粒沉在盒底形成固体，实验证明可先结冰；

3姆潘巴自制的冰淇淋中不仅牛奶加糖，还加入了淀粉类物质，在其少放糖、少放牛奶时会先结冰。

首先，是做冰淇淋、牛奶，这些物质谁都知道成分复杂，他无法保证热的和冷的成分相同，更何况他加了糖，我们知道含糖量不同的水凝固点不同。

其次，当时的技术也有限，无法做到冰箱内温度相同，连温度都不同，结冰速度从何谈起。

上家的写的很清楚，此现象被证伪。

我们也可以这样想，这有一杯热水，温度100度，冷水为结冰前瞬间温度。如果热的比冷的结冰快，那么我们可以得出，热水结冰不需要时间，可笑吗。

另外，值得注意的是热水温度确实比冷水快，但前提是必须是热水，别忘了他会降温。这点可以看温度计（体温计不行）。当温度高时降得非常快，逐渐减速，在接近是温室很长时间才能降01度。打个比方：（前提是同一种物质）有一段路前半段好走后半段难走，温度高的在前半段低的在后半段，当高温的以跟快的速度下降时到达低温时会减慢并且最终比低温的晚结冰。这个现象（指姆潘巴失错的）符合现有的物理和逻辑推理。并且可以用大学的学科知识进行演算。这个现象是想当然的推出来的因为温差越大热量传递速度越快，降温速度越快。当然在加了溶质之后可能会比温度低的纯水早降到零度但会晚节冰。

发烧--26种对付的要诀"天啊!你真热啊!"在某些场合，这或许是一种称赞。这回可不同，你感冒了！你的 体温上升，而且感到很不舒服。在你采取行动前，先听听医生怎么说。确定你真的感冒虽然体温37C是一般的正常值，但这数字并非固定值。"每个 人的正常体温都不尽相同，而且在一天当中会有很大的波动。食 物、过多衣物、情绪兴奋、激烈运动等，都会提升体温。"维克利博士 说；"其实，激烈运动可使体温上升到39C。再者，孩的体温容易 比大人高，而且一天当中的波动也较大。" "在此有个通则：假若体温在37．2C--37．7C时，开始怀疑可 能是发烧，若超过37．7C，则是发烧。"勿对抗之发烧本身不是疾病，而是一种症状。其实，它是体内抵抗感染 的机制之一。发烧甚至可能有它的用途：缩短疾病时间、增强抗生 素的效果、使感染较不具传染性。这些能力应可以抵消发烧时所经 历的不舒服。 如果你需要额外的缓解，可以试试下面的方法。补充液体当你感到热时，你的身体会流汗散热。但如果你流失大多水 分--例如当你发高烧时--你的身体会关闭汗腺，以阻止进一步的 水分流失。这使你更难对付发烧。解决之道就是补充液体。除了白 开水，医生们更偏好下列各种饮料；

①果菜汁 这些液体含丰富的维他命及矿物质，尤其是甜菜汁及胡萝卜 汁。如果你想喝番茄汁，应选用低钠的产品。

②草茶 虽然任何茶皆提供液体，但有些特别适合发烧时喝。有一种是 将等量的干百里香、菩提花(linden)及洋甘菊(chalnomiie)混合。百 里香有杀菌作用，洋甘菊减轻发炎，菩提花促进流汗。将1茶匙的 上述混合物故入1杯沸水，浸5分钟，过滤并趁温的时候喝，一天 数次。

③菩提花茶 这茶单独喝也很好，有促进排汗以及退烧的功能。将1大匙菩 提花加入l杯沸水中。依上述方法制备，趁热喝，一天数次。

④柳树皮 柳树皮含有丰富的水杨酸，这是与阿司匹林类似的化合物，被 认为是"天然的退烧药。"泡成茶，酌量饮用。

⑤黑接骨木 这是另一个传统的退烧药。你若不适应阿司匹林，可以使用黑 接骨木荼，作法与上述相同。

⑥冰 如果呕吐情形不严重，可以吃冰块退烧。在制冰盒内倒入果 汁，冰成冰块。为了引诱发烧的小孩，可在冰盒的每一格内放入葡 萄或草莓。湿敷湿敷帮助降低体温。热的湿敷可退烧。但是当病人觉得热得很 不舒服时，应以冷湿敷取代。在额头、手豌、小腿上各放一湿冷毛 巾，其他部位应以衣物盖住。假使体温上升到394C以上，切勿使用热敷退烧。应以冷敷处 理，以免体温继续升高。当冷敷布达到体温，应换一次，反复做到烧 退为止。 以海绵擦拭全身 蒸发也有降温作用。护理专家潘玛丽建议使用冷自来水来帮 助皮肤驱散过多的热。虽然你可以摄拭(用海绵)全身，但应特别加 强一些体墨较高的部位，例如腋窝及鼠蹊部。将海绵挤出过多的水 后，一次摄拭一个部位，其他部位应以衣物盖住。体温将蒸发这些 水分，有助于散热。医生们警告，虽然酒精比水还容易蒸发，但它对发烧的病人可 能引起不适。再者，吸入酒精蒸气或甚至经由皮肤吸收酒精都对病 人不利。泡澡"每当我发烧，我经常会开始发抖。这时候，泡个温水澡是最舒 服不过了。"高斯尔博士说。 婴儿应以室温的温水池澡。另一种方式则是以湿毛巾包住婴 儿，每15分钟换一次。勿忍痛你若感到非常不舒服，可服用止痛药。维克利博士建议，成人 服用2片阿司匹灵或2片acetaminophen，每4小时服用一次。 Acetaminophen的优点是较少人对它过敏。 由于阿司匹林acetamlnoPllen的作用方式有些不同，因此你 若觉得使用任何一种皆无法有效地控制发烧，不妨两种并用。每6 小时服用2片阿司匹林及2片acetamin。phen。或先服用2片阿司 匹林，3小时后再服用2片acetaminophen。但服用这些药物前，需 先经医师同意。 让小孩服用acetaminophen 年龄低于21岁的小孩，应避免阿司匹林。因为阿司匹林可能 使发烧的小孩爆发雷氏症候群(Reye's syndrome)，这是一种有致 命性的神经疾病。应以acetaminoPhen代替。以每磅体重服用 5--7毫克的方式，计算acetaminoPhen的用量。每4小时服用一 次。"增加使用频率或超过适当剂量，都有危险。"穿衣适量使用常识来判断穿衣服的多寡。如果你很热，则脱下过多的衣 物，使体内的热气可以散发出来。但假使你打寒颤，应以衣物裹身， 直到不冷为止。 特别注意小婴儿，因为当他们感到过热时，并不懂得卸下衣 物。其实，给小孩穿过多衣服或把他们置于酷热的场所，都可能引 起发烧。调节室内温度尽可能营造病房气氛，以利病人复原。勿使室温过高，德国医 师通常建议勿超过18．3C。同时，应让室内适度地透气，以帮助复 原，但勿使用通风设备。并保持柔和的光线，使病人放松心情。想吃就吃发烧期间，无需苦恼该吃什么或不该吃什么。有些医师偏好禁 食(只喝果汁)，直到烧退为止。有些医师则认为应该吃些东西才 好，因为身体发烧时，会消耗热量。总之，选择还是在你，想吃什么 就吃什么。只是别忘了补充足够的水分。医学小常识认识危险的记号维克利博士建议，若出现下列情形，应看医生。·4个月以下的婴儿发烧。·发烧连带领部僵硬。·40．5℃以上的高烧，家庭疗法无济于事时。．41．1C以上的高烧。·持续5天以上的发烧。另外，6岁以下的小孩，若口温超过38．8CC，可能引发惊风(痉 挛)。有慢性病的成人，例如心脏疾病或呼吸道疾病的患者，可能无 法承受持续的高烧。温度计使用须知你的母亲或许只要摸摸你的额头就可以浏知你的体温。但若 你没遗传到这个诀窍，或你不太信任这种方式，只好藉助温度计的 读值。下面教你如何得到最正确的结果：·使用水银温度计(玻璃制)前，先握住顶端，快速甩动一下，使水银 降至35．5℃以下。如果你担心这个动作会摔掉或打断温度计，可 以在床上作。·吃喝完毕后，至少等30分钟，才测量体温。因为吃东西会改变口 温，因而影响正确的读值。·将体温计合于舌下的凹陷处(左右皆可)。这部位较接近能反映体 内核心温度的血管。·以嘴唇固定温度计，而不是用牙齿。以鼻呼吸，勿用口呼吸，以免 室温影响读值。将温度计含于舌下至少3分钟(有些专家偏好 5--7分钟)。·5岁以下的幼儿，应以肛温取代口温。肛温通常比口温高1度左 右。肛温计较短，前端的球形较圆。·使用肛温计时，让小孩趴在你的大腿上，用一手固定他的半边臀 部。以凡士林润滑肛温计的前端，小心地插入1寸左右，切勿用 力。水银将很快地开始上升，待水银不再上升后(约1一一2分钟 后)，将肛温计取出。·若温度计不慎地在嘴巴或肛门内断裂，勿惊慌。这水银无毒，而且 通常仅是口腔表面或肛门衬膜的表面受刮伤。但你若无法找到所 有的玻璃碎片，应快看医生。·使用后，以冷的肥皂水清洗温度计。切勿用热水清洗。也勿存放在 靠近热源的地方。·使用电子温度计时，应依照说明书的指示。使用完毕，应以温的肥 皂水清洗管尖，或用酒精擦拭。应避免将水溅到读值表上。记得每 两年换一次电池。