如何测定液体当中含有酪素？用什么试剂检测

1形态和培养特征观察

采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导

2生长条件试验

(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0 85 、1 20 和1 71) (mol/ L) ;

(2)耐酸碱试验(p H :4 3 、5 7 、6 8 、8 4 、8 6 和8 7) ;

(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。

分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。

3生理生化试验

⑴过氧化氢酶测定

将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。

⑵葡萄糖产酸产气实验

在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,16g/100mL的溴甲酚紫14mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。

⑶淀粉水解实验

接种新鲜的菌种于含有05g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。

⑷明胶液化实验

将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应

⑸甲基红（MR）试验

接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。

⑹乙酰甲基甲醇V-P实验

接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中

加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性

⑺柠檬酸盐

取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性

⑻酪素水解试验

牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称15g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固

⑼厌氧生长测定

将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性

(10)厌氧硝酸盐产气

接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封油的高度约1厘米。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。

观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。

(11)石蕊牛奶的反应

牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况

(12)糖发酵实验

将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管分别取02mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。检测时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较颜色的变化,记录产酸的强弱

附一些培养基：

①PY培养基（100mL）：蛋白胨10g,酵母提取物10g,无机盐溶液40mL[盐溶液成分:无水CaCl2 02g,MgSO4 200g ,K2HPO4 10g, ,KH2PO4 10g,NaHCO3 100g,NaCl 20g](将CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸馏水中,再加500mL蒸馏水,一边搅拌一边缓慢加入其他盐类继续搅拌直到全部溶解,加蒸馏水定容至1000mL,混合后贮备于4℃)

②PYG培养基:PY在基础培养液内加入10g葡萄糖

③营养明胶 蛋白胨5g、牛肉膏3g、明胶120g、蒸馏水1000mL、pH68～70；加热溶解、校正至pH74～76，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为68～70

④柠檬酸盐斜面培养基：柠檬酸钠 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 02g

K2HPO4 1g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000mL 加热溶解后，调pH至7，再加入16%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min

⑤含硝酸钾的营养肉汤 加入2g硝酸钾入营养肉汤

416S rDNA 序列分析

这个LZ另外查好了，很多学问。

5生长曲线

活菌计数方法：采用涂布法,进行菌落计数，每隔一段时间（2-4小时）测

切削液配方成分检测：

切削液是一种用在金属切削、磨加工过程中，用来冷却和润滑刀具和加工件的工业用液体，切削液由多种超强功能助剂经科学复合配合而成，同时具备良好的冷却性能、润滑性能、防锈性能、除油清洗功能、防腐功能、易稀释特点。

切削液克服了传统皂基乳化液夏天易臭、冬天难稀释、防锈效果差的的毛病，对车床漆也无不良影响，适用于黑色金属的切削及磨加工，属当前最领先的磨削产品。

1、切削液配方

切削液配方主要成分有：乙二醇、四硼酸钠、偏硅酸钠、磷酸钠。

乙二醇：乙二醇乙二醇又名“甘醇”、“1，2-亚乙基二醇”，简称EG。化学式为(HOCH2)�6�0，是最简单的二元醇。

四硼酸钠：四硼酸钠，或称硼砂，分子式Na2B4O7·10H2O，是非常重要的含硼矿物及硼化合物。

偏硅酸钠：偏硅酸钠是普通泡化碱与烧碱水热反应而制得的低分子晶体，商品有无水、五水和九水合物。

磷酸钠：磷酸钠（化学式：Na3PO4）为磷酸盐，是一种无机化合物。

2、乳化切削油配方

乳化切削油配方主要成分有：石油磺酸钠、聚氧乙烯烷基酚醚、氯化石蜡、环烷酸铅、三乙醇胺油酸皂、高速机械油、妥尔油酸钠盐、石油酸钠盐、合成脂肪酸、聚乙二醇、工业机械油。

石油磺酸钠：分子式：R-SO3Na(R=C14～C18烷基)；结构式为：RSO3Na、其中R为平均14～18个碳原子的直链脂肪族烷基；溶解性：溶于水而成半透明液体，对酸碱和硬水都比较稳定。

氯化石蜡：氯化石蜡是石蜡烃的氯化衍生物，具有低挥发性、阻燃、电绝缘性良好、价廉等优点，可用作阻燃剂和聚氯乙烯辅助增塑剂。

环烷酸铅：制备方法由环烷酸钠与乙酸铅复分解置换而得。先将环烷酸加水升温至90-100℃，再缓缓加入30%的氢氧化钠溶液进行皂化，至溶液透明，得环烷酸钠，再用乙酸铅复分解置换得粗品，经水洗涤，加热脱水的成品环烷酸铅。

三乙醇胺油酸皂：油酸皂对动植物油、矿物油、机油、石蜡、润滑油等具有良好的清洗能力，并具有很好的防锈能力。

高速机械油：高速机械油又称高速锭子油。轻质机械油的一种，粘度较低的润滑油，由石油馏分经硫酸精制或溶剂精制并加入抗氧剂而得。

合成脂肪酸：合成脂肪酸是以石油产品经化学合成方法制得的脂肪酸。用作制皂的原料。其碳数为10～18，碳数较低的部分用于其他工业。

聚乙二醇：无毒、无刺激性，具有良好的水溶性，并与许多有机物组分有良好的相溶性。

3、防锈极压乳化油配方

防锈极压乳化油配方主要成分有：氯化石蜡、硫化油酸、石油磺酸钡、油酸、三乙醇胺、机械油。

氯化石蜡：氯化石蜡是石蜡烃的氯化衍生物，具有低挥发性、阻燃、电绝缘性良好、价廉等优点，可用作阻燃剂和聚氯乙烯辅助增塑剂。

石油磺酸钡：石油磺酸钡是目前国内应用较多的缓蚀剂。根据不同的使用条件一般添加量在1-10%。它具有优良的抗潮湿、抗盐雾、抗盐水和水置换性能，对多种金属具有优良的防锈性能。

油酸：油酸是一种单不饱和Omega-9脂肪酸，存在于动植物体内。化学式C18H34O2(或CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH)。将油酸加氢加成得到硬脂酸。

三乙醇胺：工业品的三乙醇胺含量在80%以上，其余含有10%以下的水，25%以下的乙醇胺和15%的二乙醇胺以及少量的聚乙二醇等杂质。

机械油：石油润滑油馏分经脱蜡、溶剂精制及白土处理而得的一般质量的润滑油，通常只加抗氧化添加剂。

会有相应的检测机构

分析化学发展到目前，对于未知物的分析，技术已经很完备。但是在准确度和精度上还有待提高。你要分析未知物，根据你的要求，分析化验员才好判断采取什么样的方式和方法。需要你提供如下信息：

1、样品来源；

2、样品大致可能的成分；

3、对成分分析的要求，比如，多大的浓度的样品需要知道成分名称；

4、对未知物分析含量精度的要求，比如多大误差是允许的；

等等。其他可能还需要你提供一些信息，才好方便开展具体工作。

你的要求越高，费用也就越高。几万元的费用到十几万，几十万都有可能