检测牛饲料中是否含有朊病毒用什么化学方法？

朊病毒的检测方法有如下几种：

1 动物传递实验

动物实验是判断生物体是否感染朊病毒、测定感染滴度、研究朊病毒传染性的主要手段。随着检测技术的进步，现在动物实验的许多功能已被更快捷、更准确的方法所代替，但作为生物学方法仍然是研究朊病毒不可缺少的重要环节。目前，已知的朊病毒病大多已建立了动物感染模型，小鼠、大鼠和仓鼠是最常用的朊病毒实验动物。

常规方法是将无菌的组织标本，用Teflon研棒匀浆后作10倍连续稀释，每个稀释度通常脑内接种6只小鼠(10～30μl)、大鼠(30μl)或仓鼠(50μl)。接种动物每3天检查1次，发现其出现毛乱、弓背、运动过慢和后肢瘫痪等病状后逐日检查，濒死扑杀，取脑组织作病理学检查，以验证朊病毒感染。如接种动物不发病，则继续观察至其死亡或适时盲传，最后取脑组织作病理学检查。根据动物发病和死亡数计算滴度。该方法的优点是比较敏感，是研究朊病毒生物学特性的重要实验。其缺点是费时、费力，滴定误差大，需消耗大量动物，费用昂贵。由于种属屏障和毒株、动物个体差异等因素的影响，传递的成功率往往相差较大，个别 GSS毒株的动物传递始终未获成功。因此，实验阴性并不能排除朊病毒感染，使用转基因动物是一条经济实用的削弱或消除种属屏障的实验途径，可明显改善传递效果。

2 免疫学方法

免疫学检测方法由于其灵敏度高，特异性强，方法众多，能适合不同检验要求的需要，目前已成为检测朊病毒的最主要方法。

(1)组织印迹：组织印迹技术是将灵敏的蛋白检测技术和解剖学组织保存技术结合起来，用于检测组织中微量的PrPsc。其灵敏度较高，甚至可以超过一般的免疫印迹，已被广泛地用于朊病毒的研究。

(2)斑点印迹：1990年，Serban等介绍了一种用硫氰酸胍处理的斑点印迹方法，将组织标本置于冷的裂解缓冲液中匀浆，然后500r/min离心5 min，去除不溶性残渣，上清液与含SDS样本缓冲液等量混合，吸取4μl混合液，点样于干的NC膜上，空气中干燥,iK消化，3mol/L硫氰酸胍处理，封闭后，进行免疫学检测。斑点印迹法灵敏度较低，但操作简便，对仪器设备要求低，适用大批量标本的筛查，易于普及推广。

(3)免疫印迹：由于使用了凝胶电泳分离技术和免疫检测技术，除了可以鉴定标本中特定的组分外，还能显示其电泳分离图谱，运用价值较高。免疫印迹技术简便、快速，对仪器设备要求低，而且不受组织自溶的影响，能在组织病理学结果阴性或含糊的情况下检出PrPres，具有早期确诊价值。目前，已成为朊病毒研究中最常用的检测方法之一。其基本步骤是：将待检组织标本匀浆、离心、蛋白酶K消化等一系列处理后，在125％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，随后将蛋白质转印至NC膜或PVDF膜上，封闭，用特异性抗体进行免疫学检测。

(4)免疫组化：免疫组化是利用特异性抗体直接显示组织切片上致病性PrP。由于可以对PrPres的沉积进行精确的解剖学定位，为临床病理学诊断提供客观依据，因此，具有很高的临床诊断价值。免疫组化可以检测甲醛固定、石蜡包埋的组织标本，应用面较广。其基本步骤是：将甲醛固定或石蜡包埋的组织标本经一系列预处理后，依次与特异性抗体和酶标记第二抗体反应，最后加底物显色，显微镜下观察。

(5)酶联免疫吸附实验：该方法具有灵敏、特异、简便、快速、可定量、自动化等特点，非常适合大批量标本的普查筛选工作。目前报道的用于检测朊病毒的ELISA方法有两种：一种是间接法，即先将从各个标本中提取的PrPres分别包被于酶标板的孔中；另一种是双抗体夹心法，即先用特异性抗体包被酶标板，再加入标本提取物，37℃孵育。此后两种方法都依次加入特异性1抗、酶标2抗，最后加底物显色，酶标仪读板。

(6)关于免疫学检测中标本预处理的几点说明：①适当的标本预处理，可以暴露PrPres原先隐蔽的抗原表位和(或)修复被福尔马林破坏的抗原表位，提高PrPres的免疫反应性，有利于实验灵敏度的提高。②预处理并不是万能的，多种预处理都有失败的事例，预处理的效果可能取决于预处理暴露或修复的抗原表位能否被实验使用的抗体所识别。③某些预处理(如高压蒸汽处理法)可同时增加PrPsen的免疫反应性，但这对PrPsen的检测帮助不大，Yokoyama认为这仅仅是由于PrPsen表达太低造成的。④某些实验使用的抗体不能分辨 PrPres和PrPsen，又没有用PK消化以去除PrPsen，这些实验采用预处理的目的主要是利用 PrPres和PrPsen对预处理反应的差异，筛选预处理条件，尽量增强所用抗体与PrPres的免疫反应性，抑制与PrPsen的免疫反应性，扩大二者实验结果的差异，以达到筛查患感染TSE生物体的目的。⑤不进行标本预处理，单靠选用改良的抗体，同样可以提高试验的灵敏度。

3 借助特殊仪器的检测方法

(1)电镜法：电镜检测瘙痒病相关纤维(SAF)是朊病毒检测的另外一种方法。现在认为PrPsc是SAF的组成成分。瘙痒病相关纤维为杆状、纤维状结构，其实是PrPsc在用去垢剂提取过程中，不同提取条件下形成的产物，感染生物体的组织切片中尚未发现SAF。基本步骤是：将被检组织置于10％N-laruoylsarcosine溶液中匀浆，差速离心、PK消化，重悬于蒸馏水中，负染，电镜观察。镜下可见两种瘙痒病特有的大分子纤维。电镜检查SAF灵敏度较低，不如免疫印迹方法。

(2)毛细管SDS-凝胶电泳：该法主要是通过理化方法--差速、超速离心，sodium N-lauroylsarcosine、PK处理，提纯PrPsc，然后在 Beckman P/ACE 5 500上进行毛细管SDS-凝胶电泳。根据各组分通过检测器时，在214 nm波长处产生吸收峰的时间和峰形，鉴别出瘙痒病病原因子PrPsc。该法标本用量少，无需免疫学试剂，判断直观；缺点是需用超速离心机、专用毛细管电泳仪。

(3)荧光标记肽链的毛细管电泳免疫测定法：该法是根据免疫竞争原理测定，采用无区带毛细管电泳技术结合免疫荧光技术，检测标本中微量的PrPse。其基本原理是将人工合成PrPsc特异性肽链(142～154)标记上荧光，然后与一定量的特异性抗体、羊脑提取物一起电泳，荧光标记的肽链与抗体结合后，迁移率发生改变，从而与游离的标记肽链分离开来，由于抗体的量只能结合大约50％的标记肽链，因而荧光标记的结合型肽链与游离型标记肽链的比例是固定的。当羊脑提取物中存在微量的PrPsc，由于其与标记肽链竞争结合抗体，导致结合型肽链与游离型肽链的比例发生改变，从而被仪器检测出来。该方法灵敏度很高，能检测到135 pg的PrPsc，可用于检测朊病毒水平很低的脑外组织(如血液等)。

(4)双色强荧光目标扫描法：该法是运用共聚焦双色荧光相关分光镜技术检测极其微量的朊病毒。其基本原理是利用致病性 PrPres，在适当条件下自我复制和自发聚集的特点，将重组PrP(rPrP)标记上绿色荧光，PrPres与正常构象的rPrP结合后，通过变构复制出大量的异常构象的rPrP盖。由于PrPres在一定条件下可自发聚集，从而使PrPres周围聚集了大量的rPrP盖，使其荧光强度超过游离的rPrP50倍。同时为了增强实验的特异性，又加入了标记上红色荧光的特异性单抗，使PrPres- rPrP盖聚集体又标记上红色荧光。只有同时发出高强度红、绿荧光的颗粒，才能被检测仪器判为PrPres。

目前，朊病毒领域的许多方面对人类来说还有一片空白或知之甚少，如朊病毒突破种属屏障传播的程度，通过生物制品和临床医疗传播的危险性，其他传播途径的探知，以及朊病毒致病机制的研究等等，诸多方面的问题都离不开朊病毒的检测，朊病毒检测方法的发展必将为朊病毒的研究开辟广泛的前景。

　　当前HPV的检测方法有很多种，以我的经验，目前有五种检测方法：

　　第一类就是查定量的检测方法，主要采用HC2的方法。另一个是HPV荧光定量检测法，这两种是可以做定量分析的。

　　还有三种是从分型的角度做的检测，一个是HPV单独分型，目前主要有21个分型，最多可达到27个分型。还有一种分型方法，是排除检查法，重点检测16、18型，然后排除16

18型之后，其他型别再出一份报告结果，主要是因为16、18型是常见的宫颈癌的致病类型。

　　最后一种分型方法是做分组型的检测方法，A5A6分成一个组，A7一个组A9一个组，总共三个分组，主要是根据当时致癌性的分布范围做的。

　　其中HC2这个方法它主要检测13个高危型别，结果直接显示数值是多少，能精确到小数点后一位，基本是一个半定量HPV

DNA检测的方法。目前报告单也比较简单，**的是阳性的报告，绿色的是阴性的报告，这是HC2的方法。

　　另外一个是荧光定量PCR的方法，多半是检测大概13个高危型别，同时顺带了6和11型两个低危型别，这个数据直接是报病毒的数量，举例说明一下：在10的4次方，也就是1万个细胞中能够查到多少病毒，这样的分型报告的结果是个分子型的，它报告给你10的4次方中病毒的数是多少，10的一次方2次方3次方中是多少。这样的报告方法，是一个具体病毒数量的报告，方次越大，病毒数量越多。

　　其他的分型的方法基本就是做病毒的分型，具体告诉你哪个型别是阳性，它不做具体量的报告，这五种方法是目前最常见的。具体看的作用和报告的结果都是以这样的方式去做的。

　　HC2是一个半定量的检测HPVDNA的方法，是目前经欧盟、美国FDA以及我国认证的比较准确的一个检测HPV病毒的方法，是一个“金标准”的诊断方法，它的研发大概是在2007年-2008年左右，对于现在来说研发的算比较早了，当时认定的只有13种型别与宫颈的癌症有关系，它包括了我们熟悉的16

、18型，还有31、33、 35、 39、45、 51、 52、 56、 58 、59 、68型，后续我们的科研还发现了53、 66、 73、

83型这些型别也与宫颈癌有关系，所以当时就没有包括在HC2这种检测方法之中，但是大家也不用担心，因为现在我们有分型的检测方法，其中包括了这几种型别。

　　为什么它会出现数值高低不能够跟临床完全一致的情况

　　因为我们知道这个方法是检测病毒DNA的，而HPV病毒在宫颈表面侵犯，它会有高高低低不一样的位置，存在宫颈粘膜上皮上会有浅有深。这个病毒还有一个问题，它会在宫颈和宫颈表面多个位点进行侵蚀，而刷取的方法是从宫颈表面去刷，如果刷取的部位比较多比较浅，值就会相对比较高，如果这个病变在宫颈表面和宫颈管比较深，部位比较少，病毒的量就会比较少，大家应该能理解这个现象。

　　实际上我们很多病例都会出现这种现象，当宫颈癌到晚期的时候，这个值也不一定高，所以HPV数值的高低他不能完全反应疾病病变的严重程度。

为核酸（DNA或RNA）。

病毒为一种个体微小，结构简单，只含一种核酸（DNA或RNA），必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。

病毒为一种非细胞生命形态，它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，病毒没有自己的代谢机构，没有酶系统。因此病毒离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化学物质。一旦进入宿主细胞后，它就可以利用细胞中的物质和能量以及复制、转录和转译的能力，按照它自己的核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。

扩展资料：

生物病毒的相关情况：

1、生物病毒不管是烈性噬菌体还是温和型噬菌体，都必需在活的宿主细胞中才能得以复制繁殖，利用宿主细胞的核苷酸和氨基酸来自主地合成自身的一些组件，装配下一代个体。并达到他们的目的。

2、病毒不仅分为植物病毒，动物病毒和细菌病毒。从结构上还分为：单链RNA病毒，双链RNA病毒，单链DNA病毒和双链DNA病毒。

3、病毒基因随着宿主细胞的复制而复制，不进行表达，此时细胞内病毒数量增加不明显。

-生物病毒

只含一种核酸（DNA或RNA）。

病毒不仅分为植物病毒，动物病毒和细菌病毒。从结构上还分为：单链RNA病毒，双链RNA病毒，单链DNA病毒和双链DNA病毒

病毒的生命过程大致分为：吸附，注入（遗传物质），合成（逆转录/整合入宿主细胞DNA），装配（利用宿主细胞转录RNA，翻译蛋白质再组装），释放五个步骤。因为病毒会拉近细胞间距离，易使细胞相融形成多核细胞，进而裂解。

扩展资料

最简单的病毒中心为核酸(RNA)，外面包被着1层有规律地排列的蛋白亚单位，称为衣壳。构成衣壳的形态亚单位称为壳粒，由核酸和衣壳蛋白所构成的粒子称为核衣壳。较复杂的病毒外边还有由脂质和糖蛋白构成包膜。

核壳按壳粒的排列方式不同而分为3种模式：二十面体对称，如脊髓灰质炎病毒；螺旋对称，如烟草花叶病毒；复合对称，如T偶数噬菌体。在脂质的包膜上还有1种或几种糖蛋白，在形态上形成突起，如流感病毒的血凝素和神经氨酸酶。

昆虫病毒中有1类多角体病毒，其核壳被蛋白晶体所包被，形成多角形包涵体。病毒的结构简单，没有细胞结构。病毒只能寄生在活细胞里，靠自己的遗传物质中的遗传信息，利用细胞内的物质，制造出新的病毒，这就是它的繁殖。

通俗地说，病毒就是外有一层蛋白质包裹，内有遗传信息，蛋白质就好比皮肤，遗传物质就是大脑衣壳决定病原特异性。病毒不具有细胞结构。

-病毒结构

-生物病毒

核酸检测采用咽拭子检测，有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。

口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦，刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情，张口发出“啊——”的声音就可以了，检测过程并没有创伤风险，是非常安全的检测。

检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉，不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔，从下鼻道深入抵达鼻咽后壁，然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。

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核酸检测相关知识：

核酸检测是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。

季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。

新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了，只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分，可以尽早发现感染者，甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。

感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除，不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。

人民网-核酸检测究竟是怎么回事