如何将抗体的Fab片段进行酶切及纯化

[求助]如何将抗体的Fab片段进行酶切及纯化各位老师：

我现在准备将一株鼠源性单克隆抗体进行酶切制备Fab片段并将其进行纯化。我是一个新手，前几天作过两次试验，一次用木瓜蛋白酶进行酶切，一次用无花果蛋白酶进行酶切，结果都不好，现在很着急，请那位有经验的老师帮助我一下，将您的经验和试验过程教一教我，不胜感激。    

可以看看免疫方面的书，《简明免疫学技术》科学出版社140页，切后纯化可以用疏水，离子交换。    

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101、雅诗兰黛套装小棕瓶精华+原生液+胶原霜

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137、海蓝之谜浓缩修护精华露

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181、Fresh馥蕾诗修护紧致面膜礼盒

182、敷尔佳修护贴组合积雪草面膜+灯泡膜

183、修丽可色修精华密雾

184、雪花秀润燥精华液

185、雅顿金胶

186、兰芝隔离霜妆前乳

187、EVE LOM经典洁颜霜卸妆膏

188、完美日记动物眼影盘

189、韩国JMsolution急救面膜

190、欧舒丹樱花沐浴露身体乳套装

191、卡诗神仙护发精油

192、卡诗双重功能洗发水

193、OLAY身体磨砂膏

194、海蓝之谜保湿修护套装面霜+精萃水

195、SK-1II面 部护肤套装神仙水小灯泡大红瓶

196、黛珂牛油果乳液紫苏精华水护肤水乳套装

197、farmacy深层清洁卸妆膏

198、澳尔滨健康水爽肤精萃液化妆水

199、阿玛尼蓝气垫

200、阿玛尼至臻奂颜黑钥匙面/乳霜

201、理肤泉舒缓喷雾

202、兰芝益生修护睡眠面膜

203、兰芝隔离霜

204、OLAY淡斑小白瓶Prox

205、OLAY零重力小白伞防晒霜

206、修丽可色修+发光瓶

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212、YKYB男女同款漫画人物反光印花短袖

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226、Whoo后天气丹花献光彩紧颜水乳护肤品套装

227、雅诗兰黛面部精华第七代小棕瓶精华液

228、倩碧天才黄油

229、SK-II限定版神仙水双支装

230、海蓝之谜精华面霜

231、雅诗兰黛DW持妆粉底液

232、雅顿粉胶

233、欧珀莱时光锁胶原紧致精华化妆水乳套装

234、美宝莲眼唇卸卸妆液

235、OLAY玉兰油光感小白瓶水感精华

236、欧莱雅安瓶面膜

237、黛珂多重防晒乳

238、freeplus芙丽芳丝净润洗面霜

239、修丽可杜克紫米精华

240、资生堂新红妍肌活精华露

241、兰蔻新持妆粉底液

242、欧莱雅紫熨斗眼霜

243、欧莱雅第三代黑精华

244、雅诗兰黛小棕瓶熬夜眼霜

245、悦木之源灵芝精华水

246、OL AY抗糖小白瓶面膜

更多好物，持续更新中

面霜适不适合，很多时候不是看男士女士，而是要看具体的肤质的。如果肤质不是太油bai的话，普通的面霜补水保湿效果也会很好，有些男士面霜的肤感就会稍显刺激。就比如我，在用自己的面霜的同时，也会偶尔去“偷”一点女朋友的面霜用用，效果也不错。

这里就推荐几款我觉得挺好用的：

遇见香芬男士面霜

混油皮不容易长细纹、不容易敏感肌、不容易肌肤干燥，唯一难挨的就是夏季爱出油、脸色易发黄，脸颊发干起皮。保湿又清爽的面霜是我这种混油皮最佳的选择。

但这款面霜我觉得值得入手，因为它的肤感真的超好。很少有面霜能像它这样清爽，一点都没有油腻感。保湿效果也丝毫不差,和科颜氏高保湿霜有得一拼。而且还有提亮肤色的效果，一个冬天用下来，肤色亮了不少，也均匀了很多。一百来块的面霜能做到这样，我觉得很值！

科颜氏高效保湿霜

保湿性超强的一款科颜氏高效保湿霜，里面蕴含了强韧皮脂膜屏障的橄榄提取角鲨烷，结合能够增强肌肤屏障细胞的冰川保护蛋白，以及能够补充肌肤角质层脂质的神仙酰胺成分,能够达到更好的维稳镇定肌肤的功效。

面霜乳白色的乳霜状质地，淡淡的香味，真的很好闻。而且延展性好能够很好涂匀，保湿很到位，能够让皮肤长期保持在高效保湿的状态。但是这款面霜质地比较厚重，我更觉得适合干皮使用。

Olya黄金酵母气泡霜

OLay家的这款气泡霜质地是非常轻薄，霜体质感相对来说还真有的像浓密泡泡的感觉，非常的轻薄水润。上脸能很好被吸收,吸收之后皮肤水嫩嫩的，不会觉得有任何不舒服或者厚重闷肤。

面霜除了具有高保湿效果以外，还蕴含了能够修复肌肤的黄金酵母以及烟酰胺，可以达到抗初老的效果，使用感真的特别好。按压式的瓶身设计也很方便卫生简单，总体来说性价比还是不错的。

修丽可海洋青萃保湿霜

修丽可最被小看的就是这个海洋面霜吧，它家的色修精华、紫米精华都很对得起口碑,但是这款面霜也是相当不错的。

这款面霜的质地有种神奇的丝缎感，抹开时丝毫没有油腻感，轻轻按摩吸收后全脸不见一丝油光。保湿度也没落下，油皮在暖气房里待一天也不会觉得脸干。成分中添加了生育酚等抗氧化剂和光果甘草、金缕梅这些抗敏成分，保湿、舒缓、抗敏、抗氧化都有两下子。

以上就是我推荐的几款面霜的，遇见香芬那款是我一直在用的，其它的几款都是偷偷用的女朋友的，效果我都觉得挺满意的（也有可能是我皮肤不敏感，用啥都没差）。总之选择面霜一定要以自己的使用感受去评判，切不可盲目听信他人。希望这篇回答对你有帮助，望采纳！

　随着分子生物学技术的迅猛发展，为克服鼠源性单抗的异源性反应，人工改造鼠源性单克隆抗体成为现实。1984年出现了嵌合重组抗体技术，1994年美国批准第一个嵌合抗体药物上市，至今嵌合抗体药物总数已有多个，包括Abciximab，Basiliximab，Pdtmximab，Cetuximab等。

基本概念

　人-鼠嵌合抗体：利用DNA重组技术将鼠源单抗的轻链、重链可变区插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转化哺乳动物细胞进行表达所产生的单克隆抗体(图1)。人-鼠嵌合抗体的人源化程度可达到70%，完整的保留了鼠源单抗的可变区，最大限度的保留了亲本活性，人抗体恒定区的引入则大大降低了免疫原性。

图1：利妥昔单抗：人CD20特异的嵌合单克隆抗体。 IgG抗体分子由2个重链和2个通过二硫键连接的轻链组成。

基本原理

　人鼠嵌合抗体基本原理是从分泌某种鼠单抗的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠VL(轻链可变区)和VH(重链可变区)，经过基因重组分别与人的CL(轻链恒定区)和CH(重链恒定区)区基因按照一定的方式相拼接，克隆到表达载体中构建鼠/人轻重链基因表达载体，并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体(图2)。

图2， 人鼠嵌合抗体制备过程

　对于其他类型的人源化抗体，其优势在于，技术路线简单，易于操作;抗体完整性好，在体内滞留时间长;鼠源抗体的亲和力和特异性都得到保留，在临床上得到了良好的反应。

　构建人鼠嵌合抗体主要包括：克隆鼠抗体可变区基因，钓取人抗体恒定区基因，拼接鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因以及构建载体和宿主细胞。详细内容见文章《嵌合抗体的构建》

　嵌合抗体的分类

　嵌合抗体主要有三种类型：

1、嵌合IgG抗体

　目前嵌合抗体的研究主要集中在嵌合IgG(Immunoglobulin G)抗体。其构建基本原理是从生产某种鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中得到目的抗体V区(variable region)基因，再与人类的C区(constant region)基因重组并克隆到合适载体中，然后转入受体细胞表达(如图1)。

　在构建嵌合抗体时应根据不同目的选择不同的C片段。这是因为不同类型的人抗体C区与补体和Fc(fragment crystallizable,Fc)相互作用的能力以及引发细胞溶解的功能不尽相同。在体内免疫系统中，抗体的Fc段和效应细胞相互作用，发挥特异的生物学功能。例如IgE(Immunoglobulin E)可介导炎症反应等，IgM活化补体的能力最强，IgG1的补体活化能力比IgG3强得多，且在ADCC作用(antibody dependent cell mediated cytotoxicity)触发能力上也比IgG3强得多。在与Fc受体的结合能力上IgG1和IgG3最强，IgG4次之，而IgG2几乎检测不到。

2、嵌合Fab和F(ab’)2抗体

　嵌合Fab(antigen-binding fragment, Fab)和F(ab’)2(具有两个抗原结合表位的片段)抗体的最大优势就是渗透力强。Fab嵌合抗体制备原理为：将功能性抗体L,H链的V区基因与人的轻链k和H链CH1进行重组，克隆到表达载体中，在转入宿主细胞表达。不过对于大多数该类型的抗体来说，由于亲和力较低，分子量小，很容易被肾小球过滤而从血液中消失，因此大多数不适合单独使用于临床治疗。

　为了改善效果，人们把Fab抗体改造成嵌合F(ab’)2抗体，提高了其分子量，其药代动力学也有所改善，取得了一定的治疗效果。

图3，嵌合Fab和F(ab’)2抗体

结语

　鼠单抗因为在体内可以引起HAMA(Human anti-mouse antibodies)反应，临床上的应用受到了极大的限制。随着基因重组技术的发展，人们可以对鼠源单克隆抗体进行改造，研究者们便发现了人鼠嵌合抗体—这一最早诞生的基因工程抗体。其有显著的优势：保留亲本的高特异性和高亲和力，在体内有较长半衰期，易于操作等。但是嵌合抗体虽然可以部分解决异种蛋白的排斥问题，但由于其还含有鼠源V区，依然有可能会诱发HAMA反应，干扰抗体疗效，诱发超敏反应，在临床上其应用会受到一定限制。所以随着基因工程技术，细胞工程技术等生物技术的飞速发展，研究者们又相继改造出了人源化抗体和全人源抗体。相信在相关技术的驱动下，单抗会更快更好的适用于临床，从而造福于人类。

你没有说是以b为商的什么调，以b为商可以有宫商角徵羽五种调。

以b为商的--

宫调：a

b

升c

e

升f

a

商调：b

升c

e

升f

a

b

角调：升c

e

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a

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徵调：e

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a

b

升c

e

羽调：升f

a

b

升c

e

升f

根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，将白血病分为急性（AL）和慢性（CL）两大类

1、急性白血病：白血病细胞分化停滞在较早阶段，多为原始细胞和早期幼稚细胞，病情发展迅速，自然病程仅数个月。

2、慢性白血病：白血病细胞分化停滞在较晚阶段，多为较成熟幼稚细胞和成熟细胞，病情发展慢，自然病程可达数年。

急性白血病的FAB分型：建立在细胞形态学(Morphological，M)基础上，根据主要受累的细胞系列，

①AL可分为：急性淋巴细胞白血病（简称急淋，缩写ALL）和急性髓细胞白血病（俗称急粒，缩写AML）

②CL可分为：慢性髓细胞白血病（简称慢粒，缩写CML），慢性淋巴细胞白血病（简称慢淋，缩写CLL）

③最后还有少见类型的白血病，如：毛细胞白血病（HCL）、幼淋巴细胞白血病（PLL），慢性粒-单核细胞白血病等。

FAB分形如图：

诊断也基本按照上图

临床表现，以急性白血病为例：

治疗：主要有一般（支持）治疗、化疗、分子靶向治疗、造血干细胞移植

　为什么有的销售人员总是滔滔不绝，而有的销售人员却经常语塞，最大的差别就在于没有一种好的介绍思维，而FAB法则恰恰就是训练介绍思维的一种话术。下面由我为大家整理的关于fab销售法则与运用技巧，希望大家喜欢!

　fab销售法则与运用方法

　许多人都认为销售是靠嘴吃饭的，其实并不然，这是一种偏见，销售靠的实际是脑力。一个人如果能舌战群儒，口吐莲花，那么足以证明他有较高的智力水平和丰富的知识结构。所以对于口才并没有所谓天生的说法，通过大量的训练和阅读，就会使得销售水平不断的提高。

　本文我们想和大家分享的就是一种训练表达方式的话术：FAB法则。能充分理解并运用于实际的销售过程中，就一定会使得自身的销售力逐渐提高。

　我们首先引入概念：FAB法则(Feature、Advantage和Benefit)，三个英文单词，分别代表属性、作用、益处、按照这样的顺序来介绍，就是说服力演讲的结构，能最大程度让客户相信你的就是最好的。

　F：代表产品特性(颜色，气味，材质)，一种固有属性。

　A：代表产品作用(防水，坚固，精细)，产品的优势。

　B：代表产品益处(耐用，舒服，耐磨)，对客户产生的积极影响。

　按照这个介绍顺序，可以用这样的方式解读：因为所以这就意味着

　我们先举个简单的例子，来看看法则是怎么介绍的：因为这款箱子的密封性非常强，所以它具备防水功能，这就意味着您就不用担心它掉到水里。

　这里的FAB分别是：

　产品特性：密封性

　产品作用：防水功能

　客户利益：不用担心入水

　如果把这个介绍方式放到地产销售中是怎么运作的呢

　例如，现在我们再来介绍一个沿江项目，假如这个项目在售的是一线沿江的产品五号楼，那么讲到沿江规划有江滨公园的时候，我们应该怎么介绍

　普通的介绍：您现在看到的就是五号楼，前面有规划江滨公园。

　运用FAB法则介绍：您现在看到的五号楼，因为前面有规划江滨公园，所以这栋楼的视野非常开阔，空气也很好，这就意味着您平时居家都不会感到压抑，还可以有空来楼下和家人散散步。

　通过这样的对比不难发现，运用FAB法则的介绍,显然更加具有说服力，而最重要的一点就在于通过B这个和客户息息相关的利益点，来打动客户的内心。

　对于“B“的话术升级

　我们再将FAB话术里面的“B”，进行一个升级，指的是做到“见什么人，说什么话”，要运用“走心”的方式把话说到心坎里。因为对于不同的客户，在介绍利益点B的时候，要懂得细分客户需求，单身的职场新贵，已婚的年轻夫妇，投资的客户群体，对于利益点的关注肯定是不一样的。

　就一个项目“未来发展好”这个特性F来说，对于三种不同的客户群体，就有三种不同的利益点。

　单身职场新贵可能关注交通便捷，上班方便，所以针对性的话术应该是：这个项目因为未来发展好，是政府重点打造的新区，所以以后的交通配套都会逐渐完善，等XXX路修好，到您上班的地方就很快捷了。

　已婚年轻夫妇可能关注未来教育配套，所以针对性的话术是：这个项目因为未来发展好，是政府重点打造的新区，所以以后这边会引进市内一流的学校，您小孩以后的教育问题就不必担心了。

　投资客户群可能关注升值空间，针对性话术：这个项目因为未来发展好，是政府重点打造的新区，所以随着周边成熟和配套的不断升级，升值空间是非常巨大的。

　因此作为销售人员，针对客户群体不同，要细分自己的介绍说辞，灵活应对，做到“见什么人，说什么话”。

　对于话术“B”的再升级

　最后还有一点关键的要点，即说到利益点的时候，对于客户的家里人，尤其是给老人和小孩带来的利益的时候可以进行多强调，例如和孕妇沟通的时候，说到给宝宝带来的利益点要比给孕妇本身带来利益点更加容易打动孕妇这个客户本身。

　在现场接待当中，如果家庭结构复杂的客户群体，作为置业顾问首先要去判断客户群体中各个成员的角色，一般影响成交最大的两种角色是“决策者”和“影响者”。主决策人一般是资金持有者或者是主意见者，而“影响者”则是最容易干扰“决策者”的人，通常是“决策者”的朋友和家人。

　正确的接待思路，即关注主要决策人，进行意见上的说服;同时要把利益点“B”放在主决策者的关键家庭成员或朋友即“影响者”上，进行放大关注，这样的接待在通往成交的路上往往事半功倍!