求封闭液中1%的BSA是怎么配制？？

取1g BSA，加蒸馏水，定容到100ml就行了。

最常用的封闭剂是005%-05%的BSA，封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。

一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。

特别是用单抗腹水直接包被，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。

扩展资料：

判断封闭条件，要考虑在此条件下是否能达到试验要求，即棋盘滴定要满足：阳性样品OD=08、阴性样品OD<=01，而不是看你待测样品OD变化趋势;

过低封闭浓度势必造成本底过高，但过高又会使灵敏度降低，因此只要选择能够满足你试验要求的最低BSA浓度就可以了。

另外提醒，洗涤一定要彻底，很重要的。

包被后封闭前一般要洗涤一遍，以便于洗掉结合不牢固的包被物，防止在实验中影响实验结果;封闭后一定不要洗涤，封闭的目的就是要靠蛋白填补未被包被物占领的空间，另外封闭液一般也具有保护作用。

如果不是用biotin-avidin系统的话，用5%脱脂奶粉做封闭液就可以了，廉价，效果也很好。

封闭液一般是用5%的BSA或者是用5%的脱脂奶粉，溶剂一般使用TBST。做实验的时候，我一直强调这样的一个原理，那就是在了解原理的基础之上，我们完全可以不拘泥于书本，进行创造。就拿这个封闭液来讲，要是单纯的一种封闭效果仍然不好的话，我们完全可以两种合用，我就试过1%的BSA和5%的脱脂奶粉合用进行封闭的事例。所以，搞科学研究是需要我们进行再创造的。

D、BSA交联抗原注射到兔子体内得到一抗，我们Elisa的二抗用的是羊抗兔HRP标记的二抗。请问，在封闭时，用什么样的封闭液比较好呢是无蛋白封闭液，还是羊的免疫前血清

——BSA（乙酰胺）

NGS 是normal goat serum

我们做免疫荧光染色，

10%NGS-PBS solution 用于封闭

然后用 PBST漂洗，PBST就是Tween-20 用PBS溶。

推荐用tbst进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100ml）。

很多人的经验是：脱脂牛奶封闭后背景比较干净，而检测磷酸化蛋白则用bsa（因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白，会干扰的）

在WB中，二抗孵育后不能立即显色，需要进一步处理。对于膜的处理，可以按照以下步骤进行：

1 漂洗几次后将膜放在TBST或者你用来incubate的buffer(不加奶粉或者BSA)里面，进行洗膜。

2 将膜放在适当缓冲液中，如TBST缓冲液中。

对于转膜前NC膜的处理，可以参考以下步骤：

1 将膜放在适当缓冲液中，如TBST缓冲液中。

2 漂洗几次后将膜放在适当缓冲液中，如TBST缓冲液中。

对于抗体的稀释，可以考虑以下几种稀释剂：

1 TBST缓冲液：可以作为抗体的稀释剂，适合大部分抗体。

2 牛奶制品：如奶粉等，可以作为抗体的稀释剂。

3 BSA：即牛血清白蛋白，可以作为抗体的稀释剂。

需要注意的是，具体的稀释剂和稀释比例需要根据具体的实验需求和抗体类型来确定，建议参考相关文献或者根据实验经验进行选择。