洗脱液的流速过快或过慢时，对分离效果有什么影响

洗脱液的流速过快时目的物的过早解吸，会引起区带扩散；过慢时，目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。

洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不致于太拥挤。梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。

扩展资料

根据吸附作用的强弱可选择不同的洗脱液或不同浓度的同一溶剂对各类成分进行粗分。其一般方法如下：

1、用适量水洗，洗下单糖、鞣质、低聚糖、多糖等极性物质，用薄层色谱检识，防止极性大的皂苷被洗下；

2、70%乙醇洗，洗脱液中主要为皂苷，但也含有酚性物质、糖类及少量黄酮，实验证明30%乙醇不会洗下大量的黄酮类化合物；

3、3%～5%碱溶液洗，可洗下黄酮、有机酸、酚性物质和氨基酸；

4、10%酸溶液洗，可洗下生物碱、氨基酸；

5、丙酮洗，可洗下中性亲脂性成分。

-洗脱液

-梯度洗脱

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1 平衡液是缓冲液，应该是PB或PBS，这个配方很多手册可以查，注意亲和层析的pH是一个比较重要的参数，会影响洗脱过程的，有一种镍柱洗脱方法就是高pH上样，低pH洗脱。 2 洗脱液一般是平衡Buffer中加入咪唑，没有缓冲的体系有可能造成蛋白的变性。