方法学验证指导原则原文节选

1、化学药含量测定方法的准确度。原料药采用对照品可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，或用本法所得所测定结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。

2、化学药杂质定量测定的准确度。可向原料药或制剂处方量空白辅料中加入已知量杂质对照品进行测定。如不能得到杂质或降解产物对照品，可用所建立的方法测定的结果与另一成熟的方法（如药典标准方法或经过验证的方法）进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。在不能测得杂质或降解产物的校正因子或不能测得对主成分的相对校正因子的情况下，可用不加校正因子的主成分自身对照法主成分的校正因子计算杂质含量，并应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）。

第二节 气相色谱法和高效液相色谱法

　掌握气相色谱法和高效液相色谱法的基本原理;色谱系统适用性试验的主要内容;气相色谱法和高效液相色谱法在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。了解气相色谱仪和高效液相色谱仪的基本结构。

　一、气相色谱法： 以气体为流动相的色谱法，具有分离效能高、灵敏度高、样品用量少、分析速度快等优点，不适用于难挥发和热稳定性差的物质分析。

　(一)基本原理

　1基本概念

　色谱峰参数：峰高或峰面积(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰宽(用于衡量柱效)

　保留值：保留时间、死时间、调整保留时间

　峰宽：标准差、半峰宽、峰宽

　2塔板理论：把组分在两相间的连续转移过程，分解为间歇的在单个塔板中的分配平衡过程

　理论塔板数 n=554(tR/Wh/2)2

　色谱柱的理论塔板数越多，柱效越高;同样长度中塔板高度越小，柱效越高。

　3速率理论：主要说明使色谱峰扩张而降低柱效的因素

　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　A为涡流扩散项。采用适当粒度、均匀的填料并填充均匀可减小涡流扩散，开管毛细管柱A=0

　B为纵向扩散系数。为减小纵向扩散可采用较高的载气流速;或选择分子量大的重载气;也可降低柱温。

　C为传质阻抗系数。在能完全覆盖载体表面的前提下，应适当减少固定液用量。

　范氏方程说明填充均匀程度、载体粒度、载气种类、载气流速、柱温、固定液层厚度对柱效的影响。

　(二)气相色谱仪

　1气源：FID常用载气多为氮气或氦气;TCD多用氦气或氢气为载气;ECD多用氮气或氩气

　2进样及汽化系统

　3色谱柱和柱温箱

　4检测器

　热导检测器TCD：浓度型检测器。构造简单、测定范围广、样品不破坏，但灵敏度较低。

　电子捕获检测器ECD：灵敏度高、选择性好。对无电负性基团的化合物响应低。

　氢离子火焰检测器FID：质量型检测器。灵敏度高、响应快、线性范围宽，最常用。

　(三) 应用 1鉴别：利用保留值进行鉴别。

　2检查

　(1) 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量

　(2) 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量

　(3) 加校正因子的主成分自身对照法

　(4) 不加校正因子的主成分自身对照法

　(5) 面积归一化法：一般不用于微量杂质检查

　3含量测定：外标法，内标法

　内标物要求：①原样品中不含有的组分;②保留时间与待测组分相近，但能完全分离;③纯度合乎要求。

　二、高效液相色谱法

　(一)速率理论：高效液相色谱法中影响柱效主要因素为涡流扩散项和传质阻抗项。由于液体黏度比载气大得多，而且柱温多为室温，其纵向扩散项很小，可忽略不计。范氏方程简化为 H=A +Cμ

　(二) 高效液相色谱仪： 1高压输液泵 2色谱柱：分析型和制备型 3进样阀 4检测器：①固定波长检测器;②可变波长检测器;③光二极管阵列检测器

　(三)应用：与气相色谱法相似

　三、色谱系统适用性试验方法

　1理论塔板数：不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数

　2分离度：除另有规定外，分离度应大于15

　3重复性：取各品种项下对照品2连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差不大于20%

　4拖尾因子：除另有规定外，拖尾因子应在095～105之间

定量测量时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法，测定杂质含量时须采用峰面积法。

1、内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量

(1)按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：

As／Cs

校正因子（f）＝———————

AR／CR

式中 As—内标物质的峰面积或峰高； AR—对照品的峰面积或峰高；

Cs—内标物质的浓度； CR—对照品的浓度。

再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或其杂质）和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：

Ax

含量（C x）＝f×———————

As内／Cs内

式中 Ax—供试品（或其杂质）峰面积或峰高； C x—供试品（或其杂质）的浓度；

As内—内标物质的峰面积或峰高； Cs内—内标物质的浓度；

f—较正因子

当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液，使用同一浓度的内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。

(2) 内标物质的选择

① 内标物质应是样品中部含有的组分，否则会使峰重叠而无法准确测量内标物质的峰面积。

② 内标物质的保留时间应与待测成分接近，并达到完全分离，即分离度R>15。

③ 内标物质应是纯度符合要求的化合物，若非纯品，无干扰峰也可使用，已知含量的较蠢物质也可使用，但须扣除内标物质的重量。

2、外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量

按各品种项下的规定，精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高）。按下式计算

含量： Ax

含量（C x）＝CR—————

AR

由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量或或自动进样器进样为好。

3、 加校正因子的主成分自身对照法

4、 不加校正因子的主成分自身对照法

5、 面积归一化法

由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。方法是测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。

楼主，您好。 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入进样阀的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。采用微柱液相色谱系统可以减少溶剂的消耗并达到快速分离之目的。 高效液相色谱法的主要分离机制有吸附、分配、离子交换和排阻作用。 1．对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。 （1）色谱柱 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等因素）以及色谱柱的填充，将直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在150？以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在300？以上的填料。以硅胶为载体的键合固定相填充剂适用pH2～8的流动相。当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。 （2）检测器 最常用的检测器为紫外吸收检测器，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测物的质量有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物结构均有响应；蒸发光散射检测器属质量型检测器，对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱管制和色谱峰纯度的检查。紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测物的质量呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。不同的检测器，对流动相的要求不同。当采用紫外检测器时，所用流动相应至少符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。 （3）流动相 由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不应低于5％，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。但对某些品种，必须用特定牌号的填充剂方能满足分离要求，可在该品种项下注明。 2．系统适用性试验 色谱中最难分离物质对或与其相关的物质对的分离度和待测物响应值的重复性是系统适用性试验的重要参数。 按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品对色谱系统进行试验和调整，应符合要求；或规定色谱条件下的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。 （1）色谱柱的理论板数（n） 在规定的色谱的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（Wh/2），按n＝554（tR/Wh/2）2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的效果等），使理论板数符合要求。 （2）分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为： 式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的峰宽。 除另有规定外，分离度应大于15。 （3）重复性 取各品种项下的对照溶液，连续进样3～5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于20%。也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子。其相对标准偏差也应不大于20%。 （4）拖尾因子为保证测量精度，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为： 式中W005h为005峰高处的峰宽； d1为峰极大至峰前沿之间的距离。 除另有规定外，峰高法定量时T应在095～105之间。 3．测定法 定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但测定杂质含量时，须采用峰面积法。 （1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： 校正因子式中AS为内标物质的峰面积或峰高； AR为对照品的峰面积或峰高； CS为内标物质的浓度； CR为对照品的浓度。 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： 含量式中AX为供试品（或其杂质）峰面积或峰高； CX为供试品（或其杂质）的浓度； A′S为供试品溶液中内标物质的峰面积或峰高； C′S为供试品溶液中内标物质的浓度； f为校正因子。 当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，CS=C′S，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。 （2）外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量： 含量式中各符号意义同上。由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环或自动进样器进样为好。 （3）加校正因子的主成分自身对照法 测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分自身对照法。在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述（1）法计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实测面积。这些需作校正计算的杂质，通常以主成分为参照采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种正文中。测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节检测灵敏度（以噪声水平可接受为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液中的主成分色谱峰高约达满量程的10%～25%或其峰面积能准确积分（通常含量低于05%的杂质，峰面积的RSD应小于10%；含量在05%～2%的杂质，峰面积的RSD应小于5%；含量大于2%的杂质，峰面积的RSD应小于2%）。然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液的记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。详情请参考国家标准物质网 wwwrmhotcom （4）不加校正因子的主成分自身对照法 当没有杂质对照品时，可采用不加校正因子的主成分自身对照法。同上述（3）法配制对照溶液并调节检测灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离，则按规定先记录供试品溶液的色谱图Ⅰ，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。色谱图Ⅰ上杂质峰的总面积（包括溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。然后依法计算。 （5）面积归一化法 由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。方法是测量个杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各杂质峰面积及其之和占总峰面积的百分率。

求采纳

样品检验和方法学验证时样品测定个数和进样针数的选择，是药品检验领域中分析人员平时经常遇到，并永远都在纠结的问题。目前，已有优秀的作者结合《中国药典》2015年版等法规进行了总结（药物常规检查项与方法学验证测定/进样针数讨论，见参考文献1）。高效液相操作简单，分析速度快，通用性强，是目前药企配置的最基本检验仪器之一，对高效液相检验时重复样与进针次数讨论具有重要的价值。高效液相检验的一般目的在于鉴别、有关物质检查、含量测定这3个主要目的，本文结合实际应用对目前使用最多的高效液相进样方式进行了简单的梳理。

一、鉴别

鉴别试验，通常药典在进行含量测定的同时进行鉴别（参考文献2），而某些鉴别或者说比对，离子交换色谱（如抗体的酸碱峰）、肽图、异构体、中药指纹图谱这些则是半定量或者定性的实验。对于与含量测定一起进行的鉴别，应按照含量测定的要求，我们在下面介绍。对于半定量或者定性的实验，其通常的要求是供试品与对照品一致，简单点讲就是标准品1份1针、样品1份1针。系统适用性在除药典有要求的情况下进得比较少，通常可用对照品溶液的系统适用性结果来替代。

但在日常工作中，高效液相第一针出现异常的情况比较多见。因此即使是需要长时间梯度的肽图、指纹图谱等检验，每次工作时刚开始检验时，至少应加1个平衡色谱柱样品或者流动相空白样品，以防止色谱柱未清洗干净或因为流动相梯度初次变化带来的色谱图异常。在药检中对异常色谱图的解释绝对是件头疼的事。

二、有关物质检查和含量测定

有关物质检查即通常说的杂质鉴定和定量，主要包括加校正因子和不加校正因子的主成分自身对照法以及面积归一化法、杂质对照品法（外标法）。主成分自身对照法以及面积归一化法通常可在对主成分定量是同时进行，而杂质对照品法（外标法）则需要每次以杂质对照品溶液进行外标。总体上来说，有关物质检查和含量测定对重复样与进针次数通常与含量测定时一致的，可能的区别在于杂质鉴定需要增加峰鉴别溶液（1份，1针）。外标法是最常用的高效液相定量方法，下面以外标法的不同进行分别讨论。

21 单点外标法

在含量测定中，药物的含量通常是在均匀且固定的（标示量），含量检验的规定区间通常也是围绕标示量上下波动（如80%~120%）。因此，只要供试品浓度在线性范围内并尽可能地靠近对照品浓度，采用单点外标法可以获得更准确的判定结果，而进行线性拟合过程中有能引入更大的测定不确定度（参考文献3）。

211 常规进样方法

对于单点外标法而言，通常的进样方式如下表1，特别是对于化药来说：

1) 对照品溶液第1份5针同时作为系统适用性的重复性，峰面积RSD应不大于2%。2) 对照品溶液第2份计算回收率，回收率应在990~1010%。3) 计算含量以供试品溶液峰面积平均值除以对照品溶液第1份5针平均值。4) 质控对照品作为保证色谱系统稳定性的指标，应间隔时间进行。5) 对照品溶液第2份、供试品溶液2份结果之间的差异，应根据方法学验证的结果，以相对偏差RD（如05%）或者相对标准偏差RSD（如2%）来控制。

此外，大家对于以上“对照品2份，5针+2针”的进样方式存在一些替代方式，包括“对照品1份，6针”；“对照品2份，3针+2针”等。在有方法学验证的基础上是可以理解的，但系统适用性试验作为分析方法不可或缺的一部分，可能受到监管机构越来越多的的挑战（参考文献4）。

212法规规定的生物药进样方法

在生物制品检验中，因为大分子药物的高效液相表现不如小分子化药，《中国药典》2015年版等法规规定的进样方法通常与以上常规的进样方法有所区别，法规规定的生物药进样方法见表2。

通常是采用对照品溶液1份进3针，供试品溶液1份进3针，以供试品峰面积平均值除以对照品溶液峰面积平均值（如参考文献5）。实际操作中，其系统适用性部分重复性指标大多以对照品和供试品的峰面积重复性代替，如对照品溶液3针、供试品溶液3针的峰面积RSD应不大于2%。

22 线性回归法

对于同时测定浓度范围比较大的药品（特别是工艺步骤中浓度范围更大），需要进至少5个非零的梯度对照品来进行线性回归，再线性拟合得出供试品含量。其常规进样方法与单点进样法进样方法也基本一致。

对于线性回归法，比较适合的常规进样方式如下表3，特别是对于分析时间短的药物来说：

1) 以中间值对照品进样5针计算系统适用性。2) 线性回归曲线的相关系数（r）通常应不低于099，5个浓度梯度对照品的反算回收率应进行控制（如90~108%等）。3) 计算含量以供试品溶液峰面积平均值带入线性回归方程计算。4) 质控对照品作为保证色谱系统稳定性的指标，应间隔时间进行，可以中间值对照品进样计算回收率。5) 不同浓度对照品溶液2份、供试品溶液2份结果之间的差异，应根据方法学验证的结果，以相对偏差RD（如05%）或者相对标准偏差RSD（如2%）来控制。

23 法规规定的特殊进样方法

在《中国药典》2015年版等法规，还有1种特殊的进样方法如3点线性回归法。这种方法应该是融合可单点对照法和线性回归法的优点。其特点在于在系统适用性通过后，对照品制备3个浓度，分别对应供试品标示量的不同范围（如50%、100%、150%，范围略大于或等于接受标准），回归后求出供试品含量。根据方法和检测器的不同，回归方式也有区别：如《通则3120 人血液制品中糖及糖醇测定法》用的示差检测器（RI）采用的是3点线性回归法[6]；而蒸发光散射检测器（ELSD）等质量型检测器采取的是3点对数线性回归，浙江所应用蒸发光散射检测器进行抗生素药品质量分析也主要采用的是以上进样方式。

简单分析，感觉法规规定的特殊进样方法就是对于这些不太稳定的方法或检测器，采取的一种基于单点外标对照思维的折中方法，其进样方式可参见表3。但由于比如RI、ELSD持续工作长时间下的不稳定情况，在检验任务大时，系统适用性通常不包括重复性指标，仅1份进1针；对照品溶液可以1份进1针；供试品溶液1份进1针。

三、小结与结论

1) 本文对现行法规和操作习惯下的高效液相检验时重复样与进针次数进行了简单的分析，对于不同检验药品，有着不同的进样方法。但以目前的趋势来看，符合USP、ICH规定的系统适用性要求会在国内法规上越来越严，如何针对产品特点做出符合法规精神的高效液相方法是必须考虑的问题。

2) 对于高效液相，除了其特殊的系统适用性以外，其重复样与进针次数核心精神还是参考法规对于鉴别、含量、杂质检定时的基本要求，在方法学设计和验证的时候要多考虑。尽可能以法规规定的方法做一个模板，这样在面对检查时解释起来也比较好解释。

3) 对于完全按标准进行的高效液相方法，其又可能存在着样品过多，分析时间过长，高效液相排期紧张，系统稳定性逐渐变差，也只能大家群策群力，多多考虑了。

参考文献：

1、梅希，药物常规检查项与方法学验证测定/进样针数讨论，药事纵横，2017-08-29

2、孙会敏, 田颂九 高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用[J] 齐鲁药事, 2011, 31(1): 38-42

3、陈华, 王慧 关于线性回归法与单点外标法测量不确定度评估的初步探讨[J] 药物分析杂志, 2008, 28(2):95-99

4、李飞, 李云, 许真玉 色谱系统适用性试验在分析方法使用中的重要性[J] 中国新药杂志, 2019, 28(6):30-33

5、2015年版《中国药典》三部通则3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法

6、2015年版《中国药典》三部通则3120 人血液制品中糖及糖醇测定法