草酸铵结晶紫染液的实验研究

目的 探讨活体细菌着色检测的适宜条件。方法 将金**葡萄球菌、**微球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌稀释浓度为5×107菌落形成单位/毫升 (Colony forming unit，CFU/ml)。 经不同浓度与作用时间的结晶紫(Crystal Violet , CV)着色细菌洗涤后，保存于甘油磷酸缓冲液。采用平皿倾注法测取细菌的CFU。结果 与对照组相比，2%CV染色时，细菌CFU无显著性差异（P>005），染料大于此浓度染色时，CFU有差异性（P<005）。染色时间在3min内CFU无显著性差异（P>005）。30%甘油磷酸盐缓冲液保存着色活体细菌，在48h内活性无显著性差异（P>005），60h后有差异性（P<005）。结论 实验方法适用于活体细菌显色法的形态学检测。

结晶紫活体细菌染色

THE EXPERIMENTAL STUDY OF THE LIVING BACTERIA

BY CRYSTAL VIOLET STAINING

Lu Dongming，Yang Dawu, Zhong Zhiqun， Li Yanjun

Qinghai University Medical College

Abstract Objective To explore an appropriate condition for the examination of the living bacteria staining Methods The culture of Staphylococcus aureus, Micrococcus flavus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa were collected and then centrifugally washed The final concentration is 5×107 colony forming unit/milliliter(CFU/ml) diluted by normal saline(NS) The four strains of bacteria were preserved in the glycerophosphate buffer after being dyed and laved by the different concentration and acting time of crystal violet In order to know the effect of various factors such as staining solution concentration, acting time, and glycerin buffer fabrication upon the bacterial survival rate, and two methods were carried out One was observed by the microscope, the other was put into the culture dish Results Comparing with that of the control group, the bacterial CFU was had no statistical significance (P>005) dyed by 2% crystal violet When the concentration of the dye-solution was higher than 2%, there showed the difference (P<005) In 3 min dyeing time, CFU had no significant difference (P>005) The stained living bacteria preserved in the 30% glycerophosphate buffer within 48h have not shown significant difference (P>005),while after 60h, it showed significant difference (P<005) Conclusion The method is quite suitable for the morphological detection of the living bacteria

Key Words Crystal Violet Living bacteria Staining

染色法着色灭活菌是细菌形态学检测的常用方法，广泛应用于临床实验室。而活体细菌的着色检测有实际应用价值。为此我们首次通过苯胺染料结晶紫染色细菌，探讨活体细菌着色的最佳浓度和染色时间，并对细菌保存液加以改进，旨在为活体细菌染色的形态学检测建立方法。 11 材料

111 实验菌种：金**葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌（质控菌种， 转种于青海省第一人民医院检验科），**微球菌（实验室自备）。

112 主要试剂与器材：CV染料配制;称取CV 20 g、25 g、30 g和35 g分别溶于95%无水乙醇10 ml ，加入90 ml 08%草酸铵溶液，制备成不同浓度的染液。 30%甘油磷酸盐缓冲液配制：纯甘油30 ml，1%磷酸钠溶液70 ml，硫代硫酸钠10 mg。5×107 CFU/ml麦氏细菌比浊管 购自青海省医药公司。营养琼脂培养基购自上海生物制品所。CX21型Olympus生物显微镜，日本产；SPE-250BS型细菌生化培养箱，上海产。

12 方法

121 实验细菌分组与处理：将金**葡萄球菌，**微球菌，大肠埃希菌和铜绿假单胞菌制备成菌液，经NS离心（4000r/min 10min）洗涤3次。根据文献[1]用NS配制各细菌浓度（5×107CFU/ml）。实验组每种细菌各分4株,均以8ml分装于10ml试管内, 离心（4000r/min 10min）留取细菌沉淀物05 ml,加入染液05 ml 染色。设CV为20%、25%、30%和35%浓度染色组。经离心洗涤后,加入30%甘油磷酸盐缓冲液8 ml保存备用。对照组不加染液以同样方法操作。

122 指标检测： CV浓度和染色时间与细菌存活率及甘油磷酸盐缓冲液对细菌活力影响测定,均采用平皿倾注法。细菌动力检测采用(悬滴法)镜下观察。

123 统计学方法：两组实验数据以均数±标准差(x±S)表示,组间比较采用方差分析和Dunnett检验。 21 结晶紫耐性实验结果（见表1～2）

2%浓度染色细菌3 min时活性不减，与对照组相比CFU无显著性差异（P>005）。在革兰氏阳性菌染料浓度>25%、阴性菌>30%、染色时间>4 min染色时，细菌CFU有差异性（P<005）。 表1细菌在不同浓度CV着色时的活性比较结果 注：与对照组相比有统计学意义（P<005）表22%CV不同着色时间的细菌存活率比较结果注：与对照组相比有统计学意义（P<005）

22 甘油磷酸盐缓冲液对细菌活性影响（见表3～4）

甘油浓度50%时CFU有差异性（P005）。而由30%甘油磷酸盐缓冲液所保存的着色细菌在48 h内其活性无显著性变化（P>005），60 h后有变化（P<005）。表3不同甘油浓度的磷酸盐缓冲液对着色菌活性影响比较结果（ 注：与对照组相比有统计学意义 （P<005）表430%甘油缓冲液保藏着色菌的存活率比较结果 注：与对照组相比有统计学意义 （P<005） CV是分子量为408da的人工苯胺染料,分子中有色基团通过正电荷的助色基团与细菌胞浆中带负电荷的多相胶体成分静电亲和而着色,高浓度结晶紫可抑制细菌代谢的重要酶蛋白,成为导致细菌着色后灭活的重要因素[2]。故着色细菌的活性与染料浓度、染色时间密切相关。我们通过结晶紫染料耐性实验表明,将2%CV着色革兰阳性菌的葡萄球菌和**微球菌与革兰阴性菌的大肠埃希菌和铜绿假单胞菌染色3 min并保存于改良的30%甘油磷酸盐缓冲液中。 着色细菌镜下观测保存液中其细菌胞浆色泽均匀、动力及活性在48 h内无显著性差异（P>005）。 适用于实验室活体细菌染色法的形态学检测,以及活体细菌色泽标记的生物学研究。

实验中发现着色细菌60 h后对染料有不同程度的脱色作用(着色细菌色泽逐渐变淡,细菌保藏液色泽变浓),我们认为是活体细菌通过胞吐作用外排染料的结果,这可能也是着色细菌得以存活的重要机制。其原因为着色的活体细菌在代谢过程中产生的有机酸改变了细菌胞浆内等电点,使着色染料与胞浆中多相胶体成分解离所致。

GENMED结晶紫细胞群落染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

GENMED结晶紫细胞染色试剂是一种旨在使粘附生长的单细胞层细胞（群落）摄取结晶紫染料而获得细胞繁殖密度定量信息的广谱染色材料和权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明、顶级杂志推荐的。其适用的细胞是呈单细胞层（Monolayer）生长的人体和动物细胞。产品严格无菌，即到即用，性能长期稳定，细胞着色率100%。

技术背景

结晶紫也可称之为龙胆紫。当它溶解后，可以被活细胞摄入。同时可以使DNA、蛋白质、脂肪着色。染色显示细胞核呈蓝色，细胞质呈粉红色。肉眼显示整个细胞呈深蓝色。在分光光度计或酶标仪上可以进行定量分析以评价细胞生长繁殖情况。

产品内容

GENMED清理液（Reagent A） 毫升

GENMED染色液（Reagent B） 毫升

GENMED溶解液（Reagent C） 毫升

产品说明书 1份

保存方式

GENMED清理液（Reagent A）保存在4℃冰箱里，其余的保存在室温下；GENMED染色液（Reagent B），避免光照，有效保证1年

用户自备

封口膜：用于密封培养板后长期保存

显微镜：用于观察细胞染色情况

分光光度计：用于定量检测细胞生长繁殖情况

实验步骤

1． 小心抽掉多孔细胞培养板里的培养液

2． 轻轻加入适量的GENMED清理液（Reagent A）到每个培养孔里（见下表） 多孔培养板 容量　　　　　　　　　　　　　　　　　　3． 小心抽去清理液

4． 加入适量的GENMED染色液（Reagent B）到每个培养孔里（见下表） 多孔培养板 容量　　　　　　　　　　　　　　　　　　5． 在室温下静置 分钟

6． 抽去GENMED染色液（Reagent B）

7． 重复实验步骤 和 三次，培养孔显示粉红色

8． 抽去所有液体，倒置培养板在纸巾上，使其吸干培养孔里的残存液体

9． 肉眼或显微镜观察：细胞核呈蓝色，细胞质呈粉红色。整个细胞呈深蓝色

10．用封口膜密封培养板，在室温下长时间保存

11．如果重新启封观察，发现样本干枯或收缩，只需加上适量的GENMED清理液（Reagent A）则可

12．如果需要定量测试，加上适量的GENMED溶解液（Reagent C）（见下表） 多孔培养板 容量　　　　　　　　　　　　　　　　　　13．轻轻摇动培养板，直到GENMED溶解液（Reagent C）均匀分布

14．在室温下，孵育 分钟

15．即刻放进分光光度计测读，波长为 nm

注意事项

1． 本产品为250次（24孔板）、500次（48孔板）、1000次（96孔板）操作

2． 细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉，而影响定量分析

3． 在细胞清洗过程中，可以将培养板整个翻转，一次性倾倒其染色液和清洗液

4． 本公司提供系列细胞繁殖检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能长期稳定

2． 本产品经鉴定效果满意，细胞固着力强，着色率100%

1摇摇杯的工作原理是热胀冷缩的原理，一般用来饮用蛋白粉，或者奶昔。

2摇摇杯和55度杯相类似，是一款具有快速变温水杯，是一款实用新型专利的高科技产品，瞬间因其强大功能在网络走红，成了各大电商的新宠。

3只要把蛋白粉，温水，弹簧球同时放到杯子里，盖好盖子直接摇摇就行了，这样蛋白粉和水在弹簧球的作用下就可以搅拌的很均匀。

扩展资料

摇摇杯的相关明细

1杯子采用的是相变金属填充于内部导热层与外部隔热层之间，热水通过导热层将热量释放至相变金属，相变金属快速吸热并融化，热水温度迅速降低。随后，热水降温时，相变金属凝固放热，此热量可长时间保持热水的温度于相变金属的熔点附近，达到保温效果。

2据了解，在2015年1月，“北京五十五度科技有限公司”自行研发、设计、生产了第一款“快速变温水杯”，100摄氏度的开水倒入杯中，摇一摇（约1分钟），可以快速降温至人体可饮用的55摄氏度左右温水。

参考资料：

：55度杯

如何制作奶茶:

说白了，奶茶就是牛奶和茶，所以我们需要的材料就出来了:

牛奶、茶、糖。

制造步骤如下:

第一步:

首先，我们取适量的准备好的茶，用水壶烧开。茶的量是根据个人口味来选择的。煮15分钟左右。煮好后不要开盖，用热水壶煨八分钟左右，这样才能保证茶叶的味道能更好的展现出来。

第二步:

炒糖:取一小锅，将白糖炒至浅棕色，变浓稠。

第三步:

白糖炒好后留在锅里，然后倒入我们准备好的适量牛奶。注意，这个过程要不断搅拌，因为如果搅拌不够强，白糖会结块，然后搅拌均匀就更好了。转小火，慢慢煮，直到所有的糖都融化在牛奶里。

第四步:

牛奶煮好后，可以把我们准备好的茶叶倒进去，然后搅拌均匀，继续小火煮，煮一会就好。煮一会儿就能闻到牛奶和茶叶的香味，然后就完成了。如果喜欢珍珠、椰子等调味品，可以在网上买一些，根据个人喜好添加。

然后，就算做好了美味的奶茶，也可以在炎热的夏天放几块冰降温！冷热饮料都好喝！而且非常健康！

组织培养中污染的主要型别,特点和控制方法有哪些

组培中的污染主要是细菌污染和真菌污染。细菌污染的主要特点是在材料附近的培养基中出现浑浊和云雾状痕迹。一般在接种后的1~2天即可发现。真菌污染的特点是培养瓶内往往会出现白，黑或绿等不同颜色菌丝块。一般在3~10天就能发现。控制的话，无非就是要在组培过程中要求严格的无菌条件和无菌操作。一般来讲组培污染无非以下几点原因：1，培养基灭菌不彻底。2，外植体消毒处理不完全。3，接种操作不规范，接种器械消毒不彻底。4，培养环境不清洁等。所以，如果注意以上几点，应该能够改善。

在植物组织培养中，微生物污染的途径主要有哪些, 怎样预防植物组织培养中的污染

防止污染的主要措施是：

(1 )改善环境条件。接种室与培养室要定期做好消毒与净化，接种前工作台或接种箱要开紫外灯30min以上。培养室的相对溼度应控制在70％左右，相对溼度太高时可以用抽溼机抽溼。

（2）接种人员的培训很关键，应严格执行无菌操作，对接种中所需的工具，必须经严格灭菌后才能使用。在超净工作台的操作区内，不要放入过多的待用材料，避免气流被挡住。还要定期检查超净工作台的工作质量[8]。

(3 )严查接种材料。淘汰被真菌与细菌污染的接种材料。

（4）经常检查消毒锅的灭菌质量，若发现问题要立即检修。消毒锅的压力表降到零后不能马上出锅，因冷热空气作用产生的负压效应，使外界环境的冷空气倒吸入已灭菌的培养瓶内引起真菌污染，为避免该现象的发生，消毒后培养瓶应待锅内稍冷却后才出锅[9]。

（5）检查培养容器是否存在问题。培养容器封口多用塑料盖、胶塞、棉塞、薄膜等，塑料盖用久了易老化，密封性差，也会造成污染。林盛等配制了一种“4号消毒液”对培养瓶瓶口进行消毒处理，可以把培养基污染率控制在03％以下[10]。

3 继代培养中污染的防治

初始阶段所获得的无菌材料理论上是无菌的，但在后期或继代培养中也会出现污染，这除了操作不慎带菌外，继代材料在培养室也可能被螨传播的真菌污染。这类污染可从两方面防止：（1）扩大繁殖时应有合理的程式。在获得了最初的无菌培养物之后应将其中一部分作为“原种”储存起来，分批繁殖和复检后再提供给大规模生产。（2）可通过在培养基中加入抗菌剂来防止[3]。许婉芳等将多菌灵用于金线莲组织培养的抑菌促生长，效果明显优于甲霜灵、甲基托布津及混合物，在含有多菌灵的培养基中生长的金线莲，不受微生物污染，灭菌率达100%，无白化苗，苗健壮[11]。

对植物中的内生细菌，由于它潜伏得较深，表面消毒方法无法将其消除，有时在外植体的初期培养中，包括前几代的继代培养，往往在培养基上不易被肉眼察觉，随着继代次数增加，菌量逐渐累积发展，才在培养基上显现出来[12]。黄小荣等则认为植物组培中细菌污染的原因是休眠细菌芽孢萌发的结果[13]。可以通过在培养基中新增抗菌素、茎尖培养、降低PH值等措施防止和减少细菌等内生菌污染。

王亦菲等在彩色海芋快速繁殖至4～5代时，新增200mg/L的青霉素GK，能有效抑制内生菌的生长，且不影响繁殖系数[14]。翟建中等在长春蔓的组织培养中，对了抑制内生细菌 Xanthomonas sp，使用链霉素的作用大于庆大霉素和头孢唑林钠，培养基中同时使用二种抗菌素，有利于防治细菌的抗药性，能较长时期地控制细菌污染的发展，但链霉素剂量增高，会对植物产生毒性[15]。

在培养基中新增抗菌剂，选择合适的浓度非常关键，浓度低了效果差而浓度高又容易对植物产生毒害，影响增殖或使培养的材料变黑，出现死苗、白化苗等。两种或两种以上的抗生素结合使用可以防治细菌的抗药性。抗生素和多菌灵等一般不耐高温，需要采用过滤灭菌，在生产中新增起来很不方便，而苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸钠等常用作食品中的防腐剂，能耐高温高压，在组培生产中使用比较方便。

植物材料中的内生菌也可采用反复茎尖培养的方法来脱除。因为致病菌在植物体内的分布是不均匀的，通过维管束传播，茎尖分生组织是不带菌的，通过反复的茎尖培养既可脱除内生菌又可脱病毒。

除了欧文氏菌属外，大多数细菌在介质PH小于45时不能生长。在紫苑属、鸢尾属、蔷薇属植物组织培养中，将培养基的PH值由58调至39～43，可防止大量的细菌污染[7]。胡庆等用低PH值（310）水培并改善容器通气条件，能使严重细菌污染的绿巨人团块正常增殖，对单株的生长无害，可生根的苗的比例比常规固培要高，基本解决了遭严重细菌污染后仍能带菌生产的问题[16]。

对已污染的培养物，有时因植物材料难得或重新发生要花费很多时间，也可切取较大的植株重新消毒接种。李春燕等用400或600万单位/L的青霉素无菌水溶液分别浸泡银白杨组培细菌污染苗60min或40min，可有效防治组培中的细菌污染。经处理过的苗继代培养时，不再重复出现细菌污染现象，且苗分化能力强，生根培养时，根系发达，移栽成活率高[17]。李颖等的实验研究证明，如果继代培养中只有真菌污染，采用3%的多菌灵无菌液浸泡05h以上即可，用无菌水冲洗后接种或不用无菌水冲洗直接接种都可消除真菌污染。如果在细菌污染和细菌、真菌同时污染的情况下，可采用 HgCl2消毒法，把污染的培养苗切割成较长的茎段作外植体，用自来水冲洗05h，再在超净工作台上用乙醇和HgCl2进行短时间的处理即可再度建立无菌苗培养体系[18]。

4 减少培养基中的有机成分

培养基中有机物的存在是污染产生的重要原因，去除有机物也是减少污染的一条途径。宋锋惠等在阿月浑子的组织培养中，除去培养基中的VB1、VB6、烟酸等（保留肌醇）有机成分，经 2～3代培养后，能抑制细菌生长，对丛生芽生长增殖没有影响。原因是这些都是某些细菌生长的必需物质，除去这些有机物后，细菌无法生长发育，逐渐死亡减少[19]。由日本的古在丰树教授首创的植物无糖组培快繁技术则完全除去了培养基中的有机成分，输入可控制量的CO2气体作为碳源，并通过控制环境因子，促进植株光合作用速率，使之由异养型转变为自养型，因而植株长势良好，污染率明显降低[20]。由于去除了糖，组培苗由玻璃瓶内培养改为箱式大容器培养，也可以整个培养室作为培养容器，甚至不需要严格的无菌操作，也极少污染，这项技术至少在许多植物组培苗的促根阶段应用是十分成功的。

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口罩的阻尘效率的高低是以其对微细粉尘，尤其对 25微 米以下的呼吸性粉尘的阻隔效率为标准。因为这一粒径的粉尘能直接入肺泡，对人体健康造成的影响最大。纱布口罩，其阻尘原理是机械式过滤，就是当粉尘冲撞到纱布时，经过—层层的阻隔,将一些大颗粒粉尘阻隔在沙布中。对于一些微细粉尘，尤其是小于25微米的粉尘，就会从纱布的网眼中穿过去，进入呼吸系统。防尘口罩，其滤料活性炭纤维毡垫或无纺布组成，那些小 于 25微米的呼吸性粉尘在穿过此种滤料的过程中。

组织培养中灭菌的方法主要有哪些

1溼热灭菌法通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,穿透力强,温度高,灭菌效果最好注意事项：1完全排除高压灭菌器内的冷空气有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底2紫外线 杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与溼度等因素有关我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2一般紫外灯使用超过100h,则应更换表面有尘土,降低灭菌效果紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对溼度40%~60%为宜3干热灭菌法灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于工具灭菌,在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌,火焰灭菌通常用于无菌操作中,将试管口、玻璃瓶口、矽氟塑料塞等反复通过火焰数次,利用火焰对管口等进行灭菌,阻止管口污染,作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段4干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,均可在烤箱内干热灭菌通常加热至160℃,保温2h可完全灭菌但不宜超过170℃,玻璃量具易变形降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底

在植物组织培养中，造成组培材料污染的因素都有哪些

材料除菌不彻底

培养基灭菌不彻底

容器灭菌不彻底

操作不规范

接种完成后没密封好

植物组织培养中哪些因素可导致污染的发生

污染原因11

外植体

①年龄、种类和大小。成年植株带菌多；生理年龄老的材料带菌多；杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株，均易污染；室外生长的材料带菌多；表面有泥土的材料、地下器官均带菌多；表面积大的材料比表面积小的材料带菌多[1-2]。

②取材时期和部位。雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多；阳光最强时紫外线较强，杀菌效果好，此时材料带菌较少；选取了不清洁、生长不旺盛部位的材料带菌多[1]。

③灭菌效果。外植体灭菌是组织培养的关键，灭菌效果直接决定了组织培养的成败，灭菌方法和灭菌剂处理不当导致灭菌效果差，使外植体带菌。12

组织培养过程中各技术环节操作不规范①培养基。使用长菌的母液配制培养基；培养

基pH值高、新增的有机成分均可导致细菌污染；培养基分装好后没有及时封口或封口后没有立即灭菌；培养容器口没有封严导致灭菌后细菌和真菌孢子再次进入培养容器使培养基污染；封口用的塑料盖、封口膜长时间在日光灯照射下易老化、破裂，导致密封性差，不慎使用后可能导致培养基污染；橡皮筋长时间在日光灯照射下也易松动、断裂，杂菌可能趁机进入培养容器；灭菌方法不当导致培养基污染；灭菌时间过短导致培养基灭菌不彻底；灭菌时间达到后立即开启灭菌锅，导致容器内压力差过大，使外部杂菌有可能被倒吸入容器中[1]；过滤较多溶液后，滤膜过滤效果较差，使过滤后的溶液有菌，加入培养基后造成污染。

②培养容器和接种器具。培养容器不清洁；培养容器被污染后灭菌不彻底，再次使用时导致污染；高压灭菌锅或烘箱内培养容器、接种器具装得过满，影响灭菌效果；培养容器、接种器具灭菌时间过短导致灭菌不彻底；灭菌结束后立即开启高压灭菌锅或烘箱，强烈的冷热对流会导致冷空气被吸入包扎层内而重新造成污染带菌[1]。

③接种人员。过长指甲；双手未清洗干净；衣服和头发有很多灰尘，接种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩；不慎将已污染的培养材料拿入超净工作台，转接后再次污染；培养容器中接种的培养物过多；超净工作台上物品摆放过多、过高使气流被挡住，导致灭菌效果差；接种时说话或咳嗽会拨出大量细菌；操作时手超出工作台面；手接触培养容器边缘，放在器皿、接种器械上方致使微生物落入培养容器中；开启培养容器的塞子、盖或封口膜时空气进入带来灰尘；接种过程中器械被手或带菌材料污染后未经消毒，再次使用后又污染了材料；没有在超净工作台下风方向操作而使菌类随风飘落到容器中[3]；中途离开超净工作台后马上又继续接种，将培养基、器械等物品拿入超净工作台继续接种而带入灰尘，顺风飘入器皿。服装、帽子、口罩、拖鞋长期穿戴后较脏，表面有大量灰尘，未经清洗反复穿戴后造成污染。

④接种室和培养室。人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌，尤其是接种过程中非工作人员的进出；接种室设计不合理，造成室内灰尘、细菌过多；超净工作台置于灰尘太多的地方，过滤装置使用过久、保养不当造成失效；组培室、接种室门窗封闭不严，苍蝇等趁机飞入，利于杂菌传播；培养室面积大易污染，室内温度高、空气溼度大，菌类繁殖旺盛也会加重污染

植物组织培养中哪些因素可导致污染的发91？如何防98污染

污染 （汉语词语） 编辑

污染，汉语词语，是指使沾上脏物或有害物质或受坏思想的影响。

中文名 污染 外文名 pollute 拼 音 wū rǎn 注 音 ㄨ ㄖㄢˇ 同义词混浊 浑浊 玷污 反义词

1 [contaminate;be ear;defile;stain]∶使沾上脏物或有害物质

放射物污染了整个地区

2 [pollute]∶指受坏思想的影响

心灵受污染

3 [ ear;involve]∶指诬陷或牵累[1]

在植物组织培养中，哪些因素可导致污染的发生

一，外植体没处理干净造成污染

二，污染的培养皿没有处理好造成二次污染

三，镊子手术刀等工具污染，培养基没灭菌，工作台没灭菌

四，接种时没有靠近火焰瓶口掉落的菌，操作不熟练增加污染率

五，实验员说话打闹，工作密集

六，实验室大规模污染

大气污染控制方法有哪几种,其特点如何

大气污染控制可以分为大气除尘，除杂，除臭，消毒等

除尘有布袋除尘、静电除尘、喷淋等

除杂为废气处理，如脱硫，有溼法、半干法、干法

除臭有生物除臭、生物滤塔除臭、活性炭除臭等

汽车噪音污染的控制方法有那些？

这个好像没什么方法 看你是在那个角度 如果在车里 那就只能改一下排气管单效果不一定能好

基本思路

先取样，再培养，后分离，最后鉴定

一、取样

用被蒸馏水湿润棉花再硬币表面擦拭取样

二、培养基配置

微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物，但不一定需要外界补充，有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

我们一般用LB液体培养基来扩大培养样品，培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤：

1．称量：准确称取各成分。蛋白胨05g，酵母提取物025g，氯化钠05g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。

2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。

4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。

三、灭菌和消毒

1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。

3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

4．比较消毒和灭菌：

比较项

理化因素的作用强度

消灭微生物的数量

芽孢和孢子能否被消灭

消毒

较为温和

部分生活状态的微生物

不能

灭菌

强烈

全部微生物

能

5．注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸；③在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；⑤接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；⑥接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落了。

四、细菌的分离

1．划线分离法：用接种环蘸培养后的样品菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。划线到最后，可使细菌间的距离加大。在培养10～20h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。

其操作步骤是：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第1次平行划线 3～5条，转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。

取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。

2．涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－5 ～10－7之间，然后取01ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为适合。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。

划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。细菌的两种分离法各有优点,都可采用。

五、菌落和菌种种类的辨认

单个细菌用肉眼是看不见的，但是，当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、颜色、光泽度、透明度等方面具有一定的特征。

细菌的菌落表面一般是光滑而湿润的，有黏稠性，多数透明或半透明，但也有细菌的菌落表面是干燥、有褶皱的；放线菌由于有纤细的菌丝并可产生孢子，所以菌落表面是紧密的绒状、坚实多皱，长孢子后就成粉末状，由于菌丝和孢子有多种色素，所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不同的颜色，菌落不易用接种环挑动；酵母菌落类似于细菌菌落，表面光滑而湿润，有黏稠性但大多呈乳白色，少数呈红色。

如果菌落无法辨认，只有借助于显微镜观察。在显微镜下细菌一般为杆状、球状和弧状，直径都在1um左右；放线菌菌丝是没有横隔的分枝丝状体，气生菌丝顶端分裂成串状孢子，孢子丝有直线形、螺旋状、弯曲式或轮生等；酵母有卵圆型或丝状，但卵圆形细胞大于细菌，直径约5~7um。 http://www5ykjcom/Health/gaoer/45680htm

发红、起包、溃烂，假货护肤品不仅对正常的皮肤伤害大，对敏感性的皮肤伤害更大。假货中的化学成分和激素，轻则可以接刺激皮肤引起上述症状，重则可能就毁容了。所以大家在购买的时候

教您泊美防晒乳鉴别真伪

看产品包装

产品的包装就像我们的衣服一样，是对产品的一种美的宣传。正品包装精致，包装盒材质较好，瓶身材质细腻，有点陶瓷的感觉，上面的印刷也很清晰，看上去就比较赏心悦目。而假货的瓶身包装质感比较差，上面的印刷也不是很清晰，瓶底纹路的延伸比较短。还真是不对比不知道，一对比吓一跳啊。

封口的材质

接下来我们再看封口，正品的封口有一层独立的封口膜，整个封口都比较结实，封口的材质也比较好，给人一种高档的感觉。而假泊美防晒乳的封口可能是制假商为了节省成本，这些细节的地方能省则省，所以看不见有独立的封口膜，产品安不安全我们都无法保证。而有些高仿品虽然有一层封口膜，但是质地较薄，还比较松动，等于是一个虚设。

质地

人们都说画虎画皮难画骨，这句话说的非常有道理，用在真假对比中是再合适不过了。假货即使外表仿的再像，内里的质地却根本仿不出来。正品泊美产品颜色纯正白皙，质地轻柔，看起来水润滑爽，我都有想要吃掉的冲动。而假货的质地真是不敢恭维，不但不均匀，还比较粘稠，延展性不是很好，看起来就比较厌恶，想直接扔掉。

闻味道

由于正品的材质都是取自植物精华，经过特殊加工制成的，所以闻起来味道很小，清新自然，香味优雅，绵绵悠长，给人一种心旷神怡的享受。而大多数仿品是经过化学添加剂制造而成的，香味比较浓，有种劣质香水的味道，香味有些刺鼻，但是持久性比较短，很快就消散没了。

注意事项

在涂抹脸部时，将适量产品置于掌心，之后均匀的涂抹整个脸部；在涂抹身体的时候，直接将产品呈线条状置于肌肤上，之后用掌心画圈式均匀涂抹。我们在纸巾或者毛巾擦完汗之后，最好再次的涂抹防晒乳，以修复被擦汗时涂抹掉的产品。

参考资料

来自个人的一些经验和 经验内容仅供参考，如果需要解决具体问题（尤其在法律、医学等领域），建议您详细咨询相关领域的专业人士。