首先要确定各个峰的归属,比如说氢谱,可以加一些有特征吸收峰的内标物质,比如苯。内标物和样品需精确称量,通过峰面积和各物质分子量去折算。
这个定量有一定误差,一般相对误差不会超过5%,同时跟你的实验技术有关。
内标法:
是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。
外标法:
外标法是以待测成分的对照品作为对照物质,相对比较以求得供试品含量。
内标法
内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。
使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被色谱拄所分离,又不受试样中其它组分峰的干扰,只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值,即可求出待测组分在样品中的百分含量。
外标法
外标法可分为工作曲线法及外标一点法等。
工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线,求出斜率、截距。在完全相同的条件下,准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液,根据待测组分的信号,从标准曲线上查出其浓度,或用回归方程计算,工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距应为零,若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零时,可用外标一点法(直接比较法)定量。
不是同一个东西。内标即内部标准之意,指在定量分析中添加于检材内的一种适 当的化合物纯品,其测得值是计算被测组分 含量的参比依据。内参是与目的基因加于同一反应管中,与目的基因同时进行扩增。
内标法的优缺点;
优点:①在色谱柱不超载的范围内,定量结果与进样量重复性无关;②只要被测物质和内标物出峰,且能完全分离就可定量,与其他组分无关;能避免实验前处理操作中的目标成分丢失造成的定量不准确。
缺点:每次做样需要加入内标,且内标物要求与样本成分不干扰,不反应,但要有相同或相似的理化性质。
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