液相色谱C18柱堵塞后如何冲洗柱子，能用纯水 冲柱子吗？

C18柱子不能用纯水冲洗，再说本来就堵了，压力很高应该选择压力低的溶剂。

如果你确定是堵塞了，就用纯乙腈反冲，先用低一点的流速，比如01ml/min，看压力情况，不要超过200bar，再慢慢提高流速，但不要超过1的流速，如果是真的堵了，可能会压力慢慢降下来的。

如果上面方法不行，那还有可能是盐析堵的，那就用乙腈：水=90：10反冲。

1、反相柱子：一般适用范围比较大。分离极性比较小的物质。极性强的物质先出柱。 ODS就是C18柱子。

RP-8和RP-18分别是C18柱子和C8柱子。

C18柱子和C8柱子是柱子的碳链的长度不一样的。

碳链增长了,也增加了键合相的非极性作用的面积,对保留值和选择性都有影响,随烷基碳链的增长对溶质分离的选择性也增强了但是对单一或简单组分确实看不出太大区别。

2、正相柱子：一般分离光学异构体和反相柱子不能分离的极性比较大的物质。 APS为NH2柱子

另外diol 代表的是球形硅胶邻二羟基丙基醇基柱，正相柱，极性强的物质后出。

硅胶柱子的特点是可分离异构体，柱子的载样量大，用于制备分离，不污染收集的流分了，缺点是分析应用不方便，如流动相的含水量应该严格控制，再现性较差，需较长的平衡时间，不适用于梯度洗脱。

碱性化合物在氨基和二醇柱上的保留强，而偶极化合物在腈基柱子上的保留强。 建议您看看色谱分析等专业书籍有帮助的。

一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。

2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为25分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因我用的是离子交柱。

答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？

3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？

答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。

如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？

答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。

5、氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？

答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含05-10％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如01％。

一、填充材料不同

1、C18色谱柱：键合到硅胶上的烷烃是18个碳，填充的是C18。

2、C8色谱柱：键合到硅胶上的烷烃是8个碳，填充的是C8。

二、极性不同

1、C18色谱柱：C18在极性较弱的一侧。

2、C8色谱柱：C8在弱极性较强的一侧。

三、作用不同

1、C18色谱柱：适合分析弱极性物质里极性更弱的物质。分子量较小的物质，经常用C18来进行分析和分离。

2、C8色谱柱：分析弱极性物质里极性稍强的一类物质。由于C18比C8的碳链更长，因此带来更好的保留特性。因此C8就更适合分析大分子类的物质，比如一些球蛋白等，都用C8和缓冲盐洗脱剂来配合使用。

-色谱柱

按看说明书或咨询色谱柱厂商，防止损害色谱柱，离子柱都不便宜，小心为上。

用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则

可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定

量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量<90%不会对色谱柱造成任何影响。

原因分析：

首先，由于目前所用的色谱柱大多以硅胶为基质，硅胶的溶解特点是在纯水中的溶解度比在含有一

定浓度有机溶剂的流动相中要大得多，所以长时间的用纯水冲洗会导致固定相的流失，引起柱效下降。

其次，对于常规的 C18 柱而言，由于C18 长链与水是不互溶的，C18 长链之间的相互作用力大于

C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结

的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出

现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱（如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱），这种纯水柱可以用纯

水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。

第三，如使用过含缓冲盐的流动相的色谱柱，用纯水冲洗，并一定能将缓冲盐完全洗去。因为，由

于缓冲盐难溶于有机溶剂，C18 反相柱中用的填料是在硅胶表面上接上许许多多的C18 长链，相当于一

个疏水的有机相，而硅胶基体被有机物质包裹着，所以用纯缓冲盐水溶液做流动相时也许缓冲盐不容易

到达硅胶基质，不至损害基体。但所用的流动相通常会含一部分有机溶剂，而且这些有机溶剂与C18

长链是互溶的，因此有机溶剂的加入增强了流动相渗入硅胶基质的能力，能使部分缓冲盐达到硅胶基质。

同样的道理，用纯水冲洗只能洗掉表面的缓冲盐，而渗入深处的缓冲盐则仍然残留在那里。所以最好在

水中加入部分有机溶剂进行冲洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要视分析

时使用的流动相来定，原则上，用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于（缓冲盐用后清洗的情况，

推荐使用“等于”）分析时所用流动相中水的比例。

相同长度，相同内径及粒度，还有其它分析条件也相同的情况下C18色谱柱肯定要比C8色谱柱更具有保留的可能性。也就是说如果你做的有机酸用C18柱子分析时是5分钟出峰，那么用C8柱子分析就会是小于或等于5分钟，不可能是大于5分钟的。当你分析的物质的极性越弱，这种差别越大。比如分析一些近乎非极性的物质时，用这两种柱子的保留时间几乎可能会相差一半。

。乙酰水杨酸(站内联系TA)先试试甲醇或者乙腈吧，异丙醇还是蛮贵的，ldq0501(站内联系TA)还是用乙腈冲冲看，这个粘度小，要是冲不下来再考虑别的肥企鹅(站内联系TA)纯异丙醇粘性比较大，洗脱能力虽强，但对柱子不好。常见的柱子再生方法可以看看柱子的说明书，例如，氯仿,甲醇，水，4到5倍柱体积依次冲洗，或者少量dmso，记得好像是这样的。用异丙醇的话，可以跟甲醇1：1洗脱。luxin6222(站内联系TA)如果乙腈能够洗干净，就不必考虑异丙醇。这个看柱子污染情况而定。一般异丙醇是最后采取的措施。如果真的要用，可以考虑放慢流速，与粘度小的比如乙腈混合后使用，再加点温度，总之是降低些粘度。么辣子(站内联系TA)千万不要，否则柱子就毁了。用甲醇或着乙腈。hxl4054(站内联系TA)异丙醇要用甲醇稀释很多倍才能用，否则那柱压……ans(站内联系TA)用甲醇重试试！xuedan0628(站内联系TA)额~~没用过~偶用过一次四氢呋喃，LZ可以考虑一下~~lzh1220(站内联系TA)这个可以用，溶剂强度异丙醇>乙腈>甲醇，柱子污染了可先用甲醇或乙腈长时间冲洗，若仍不能解决可以考虑异丙醇，用异丙醇时应降低流速，以免蛀牙过高！本人用异丙醇救过C18的柱子的！jingnuo(站内联系TA)异丙醇是不能经过柱子的啊，而是用来冲液相系统内的气泡的。使用的时候要把柱子取下换上两通阀。至于冲柱子嘛，把柱温调的稍微高一些，用乙腈冲一下。