以琳集团创始人鑫鑫：你也可以把微商做到国外

在当今这个信息大爆炸的时代，提及移动互联网创业，提及几乎人人都有的微信朋友圈，提及微商，我们都不会陌生，微商兴起于微信用户大幅度增长的爆发期，看似好做，但也非常不容易，做到扩张到海外的高度更是凤毛麟角。以琳集团联合创始人以琳鑫鑫便是其中一个，短短三年时间内，就把代理做到了遍布国外。

以琳集团创始人鑫鑫，是怎么样把代理做到国外的？

2015年1月，鑫鑫与以琳创建了以琳集团。那天开始，鑫鑫就知道原来命运真的可以改变，全靠你的选择与努力。

建团初期，以琳鑫鑫自己仅仅用了一个月的时间就创建了百人团队，一年时间以琳集团组建了属于自己的万人团队！如今不到三年的时间已经有了自己的品牌，近十万的代理商！

作为以琳集团第一团队的以琳鑫鑫团队，不仅仅国内市场风生水起，国外市场也是一片繁荣，邻国缅甸代理商就有200多。

两年多的时间，鑫鑫倾尽心力为整个团队，从早上起来睁眼第一件事就是拿起手机处理完问题再去洗漱吃饭，一直到晚上大家都睡了，鑫鑫才有自己的时间去思考，往往都是忙到了凌晨两三点钟！她儿子总是说：你总是工作工作，就不能陪我玩一会吗？每次听到这样说，鑫鑫都是一阵心酸。庆幸的是，她做的是微商，如果她是做别的事业可能都会和孩子分开。她和儿子说：“宝贝，你应该知足了，如果妈妈是作别的工作，你别说每天还可以看到妈妈，可能一个月都难得见一次了，有多少留守儿童一年都见不到妈妈爸爸一次！”鑫鑫每天都可以看着宝宝成长，陪着他一点点长大！

以琳鑫鑫都带着代理去过的地方：

2015年10月以琳集团三亚游

2015年12月以琳集团泰国游

2016年3月30日以琳集团Appleme上海明星见面会

2016年5月20日以琳集团韩国游

2016年5月29日山东烟台线下推广

2016年7月5日以琳集团Appleme巴厘岛环球之旅

2016年8月26日以琳集团天津领袖峰会

2016年8月27日参观以琳鑫鑫天津百万仓库

2016年10月30日以琳集团Appleme第二届明星年会

2016年11月1日以琳鑫鑫团队三亚七日游

2016年11月23日杭州探班朱梓骁，理参与《我的真心男友》拍摄

2017年浙江金华培训

2017年9月以琳集团新品发布会

2017年10月参与央视访谈《超越》栏目

2017年10月上海豪华邮轮5日游学

2017年11月17日缅甸游

2017年12月30日以琳集团明星年会（未完待续）……

以琳鑫鑫还会带代理们走更多的城市、更多的国家，体验不同的生活，参加各种宴会，见明星，走红毯，穿上美丽的礼服和高跟鞋，她相信这是每个女孩心中的梦。她更会带着大家做各种有意义的事情，做公益，去山区帮助有需要的孩子，老人！每天让更多的人知道自己活着的意义！

线性化方便目的基因的插入重组，我们一般在Sal1位点线性化，否则不能通过同源重组整合到酵母的基因组上。一般来说，选SacⅠ线性化整合，重组率要高一些

不同的酶切位点的产生的线性化的酵母的表性如下

重组质粒βhCG-pPIC9K的构建及嗜甲醇酵母(Pichia pastoris)的转化

目的:为用基因重组技术表达hCG避孕疫苗抗原,构建在酵母细胞中表达的重组质粒βhCG-pPIC9K, 转化嗜甲醇酵母 方法:根据βhCG的cDNA 序列设计两条引物,使上游带EcoR I酶切位点,下游带Not I酶切位点,以质粒βhCG-PBS KS为模板,进行PCR扩增反应;将所得的DNA片段经EcoR I和Not I双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR筛选阳性克隆并用双酶切鉴定重组子βhCG-pPIC9K 再用电打孔法转化酵母(Pichia pastoris),用缺组氨酸MD平板筛选阳性株并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株 结果:用所设计的引物扩增出两端分别带EcoR I 和Not I酶切位点的βhCG DNA片段,插入pPIC9K并导入DH5α获得阳性克隆,经PCR 反应和双酶切鉴定表明重组质粒是βhCG-pPIC9K,并转化嗜甲醇酵母获得耐受4 mg/mL G418的菌株 结论:构建了重组质粒βhCG-pPIC9K并获得插入重组质粒βhCG-pPIC9K的嗜甲醇酵母

线性化酵母前后跑对比电泳。切开后的条带应该跑的慢，完整质粒跑在前面，如果酶切不完全，那么线性化后的泳道就有两个条带，其中一个同质粒相同。

还有就是氯仿、乙醇回收法是可行的。

1加等体积等酚氯仿，轻轻颠倒混匀，10000g离心5min，取上清，重复加酚氯仿抽提三次。

2加25倍体积等无水乙醇何1/10等3M NaAc，混匀，10000g离心2min，去上清。

3沉淀加80％乙醇，润洗，10000g稍离心，去上清，重复三次。

4自然干燥，加10ul（50ul的酶切体积）无酶水，取1ul稀释10倍电泳检测，其余-80℃保存

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是。根据查询腾冲以琳珠宝有限公司发布的信息，该公司是连锁的，在北京、上海等地都有店铺，每年利润很高。腾冲以琳珠宝有限公司，成立于2015年，位于云南省保山市，是一家以从事批发业为主的企业。