人体血液的组成十分复杂。其中在样品血浆中,将有形物质(红细胞、白细胞等)去除后剩余组分中的成分也是比较复杂的,而这些成分往往对内毒素的测定存在很强的干扰作用,因此在进行血浆中的细菌内毒素检测前,必须将血浆样品中这些干扰物质去除,方可进行检测。目前,人体血浆的主要干扰物质有:a2纤维蛋白溶酶抑制剂,抗凝血酶Ⅲ,a1抗凝血蛋白酶,抗凝因子Xa,纤维蛋白酶胰蛋白酶。
除去干扰物质的方法主要有:
主要包括有:表面活性剂处理法、凝胶过滤法、新高氯酸法(New PCA)等。厦门市鲎试剂实验厂有限公司的内毒素检测鲎试剂盒(动态浊度法)配套独特的内毒素检品处理液。用这种处理液对体液进行稀释加热处理后能有效消除各种体液对内毒素的干扰,使用非常简便。 (厦门--鲎试剂)
细菌内毒素检测方法分以下两种:
一、家兔热原法
由于家兔对热原的反应与人基本相似,家兔法为各国药典规定的检查热原的法定方法。
《中国药典》2005年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品,静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况,以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性。家兔法检测内毒素的灵敏度为0001μg/ml,试验结果接近人体真实情况,但操作繁琐费时,不能用于注射剂生产过程中的质量监控,且不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性 药物制剂。
二、鲎试剂法
细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。
鲎试剂法又称凝胶法,系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反立的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。
由于鲎试剂法简单﹑快速﹑灵敏﹑准确,已广泛用于临床、制药工业药品检验等方面。鲎试剂法检查内毒素的灵敏度为00001μg/ml,比家兔法灵敏10倍,操作简单易行,试验费用低,结果迅速可靠,适用于注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某些细胞毒性药物制剂,但其对革兰阴性菌以外的内毒素不灵敏,鲎试剂法尚不能完全代替家兔法。
中科检测开展细菌内毒素检测服务。
鲎试剂灵敏度的测定值(λc)
λc=1g-1(∑X/4)
式中X为反应终点浓度的对数值(1g)。反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
扩展资料
鲎试验的研究可以追溯到十九世纪八十年代左右,但是在1956年美国的约翰·霍普金斯大学动物学家FBang的一篇论文《鲎的一种细菌性疾病》发表后,人们才发现了鲎血液的实际医用价值。
鲎试剂主要成分是鲎血细胞溶解物经氯仿处理去除了抗脂多糖因子,并加入适量二价钙、镁离子,含有C、B、G因子。
因此,科学家认为血液呈淡蓝色的鲎在医学研究中有独特作用。用鲎血制成试剂,再滴入注射液,若试剂立即凝固或变色,就说明注射液内含有使人发热、休克甚至死亡的细菌内毒素。
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