菌落总数测定是什么?

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

菌落主要作为判定食品被污染严重程度的标志。如果检查出菌落总数越高，危害人体健康的几率就会增加，更说明人体食用该食物后引起胃肠道症状几率会增高。

检验方法

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量。

依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。

一、空气中微生物的检测方法------细菌总数

（营养琼脂，121℃高压灭菌20min，培养时间37℃,48h）

1两种方法

（1）撞击法(二级或者六级微生物采样器)

（2）自然沉降法（暴露5min）

采样：梅花布点，高度：12~15m；离墙：1m。

二、茶具微生物检验方法

（一）细菌总数

1、生理盐水的制法：将氯化钠（85g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。

2、采样：棉拭子湿润生理盐水，在茶具内、外缘涂抹50cm2，即口唇接触处一圈（1~15cm），用灭菌剪刀剪去棉签手接触处，将棉拭子放入10mL生理盐水中，4h内送检。

3、检验程序：

检样→各1mL加入两块灭菌平皿（若污染严重，可十倍递增稀释）→37℃，48h培养→菌落计数→报告

4、单位：cfu/cm2。

（二）大肠菌群

1、培养基：乳糖胆盐发酵培养液（双料的，每管10mL，115℃高压灭菌15min）

2、检测方法：发酵法（具体内容课本11页）

3、检样（测定细菌总数余下的样品）

4、革兰氏染色过程：（阳性菌显紫色，阴性菌显红色）

（1）初染：1min，水洗；

（2）碘染：1min，水洗；

（3）脱色：30s，水洗；

（4）复染：1min，水洗，待干，镜检。

5、结果报告：凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群。

三、毛巾、床上卧具微生物检测方法

（一）细菌总数

1采样

（1）毛巾、枕巾：对折后两面的中央各25cm2；

（2）床单、被单：在上下两部中央25cm2来回涂抹；

2、检测程序同茶具细菌总数检测

3计算单位：cfu/25cm2。

(二)大肠菌群（检测程序同茶具大肠菌群检测）

1涂抹法：（用测定细菌总数时采集的样品）

四、理发用具微生物检验方法

（一）大肠菌群

1、采样

推子：在推子前部上下部分均匀各涂抹三次；

理发刀、剪和修脚工具：在使用的刀、剪面的两侧各涂抹一次采样；两个刀或者两个剪为一份样品。

2、检样5mL倒入双料乳糖胆盐发酵管，37℃，24h培养；

3、分离培养：接种伊红美蓝平板，做革兰氏染色镜检；

4、证实试验：接种乳糖发酵管37℃，24h培养，观察产气情况。

5、结果报告：乳糖管最终产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，可报告为大肠菌群阳性。

（二）金**葡萄球菌

1、培养基：75%的氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基

2、步骤：

（1）做大肠菌群剩余的5mL倒入培养基中，37℃，24h培养；

（2）接种血平板，37℃，24h培养；观察形状：圆形、金**、凸起、表面光滑、周围有溶血圈；

（3）挑菌落做镜检：革兰氏阳性（红色），葡萄状排列；

（4）甘露醇发酵试验：接种到甘露醇发酵培养基中，37℃，24h培养，观察是否产酸；

（5）血浆凝固酶试验

玻片法：在干净的玻片两边，一端滴一滴生理盐水，一端滴一滴血浆，接种环挑菌落分别与它们混合。5min后均无凝固现象的为阴性；若血浆中出现颗粒状凝块而生理盐水中没有，则为阳性。

五、拖鞋微生物检验方法

霉菌与酵母菌

（生理盐水中要加入玻璃珠）

1培养基：霉菌培养基、（虎红）孟加拉红培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）

2取样：有棉拭子在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处的5cm×5cm面积上均匀涂抹3次，一双拖鞋为一份样品；

3将盛有棉拭子的试管在手心用力振荡100次，使霉菌孢子分开；

4培养：在霉菌培养箱中25~28℃，培养观察一周。

5单位是cfu/50cm2。

六、浴盆、脸（脚）盆微生物检测

（一）细菌总数

无菌生理盐水：分装125mL/瓶供浴盆采样；50mL供脸（脚）盆采样。 采样部位：在盆内侧二分之一到三分之一高度；

布点：浴盆梅花布点；脸（脚）盆相对两侧壁布点；

方法：涂抹法（与茶具方法一致）

单位：cfu/25cm2。

（二）大肠菌群(同茶具)

七、游泳池水微生物检测

（一）、细菌总数

1采样瓶：无酸、无碱、无毒的玻璃容器。

2灭菌前要加入足量的10%的硫代硫酸钠溶液，一般125mL水样加01mL。

3采样

4操作步骤（与茶具细菌总数一样）

（二）大肠菌群

1培养基：三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（蒸馏水量不变，其他成分三倍）

2步骤

（1）推测性试验

2个装有50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管内（装有小试管）各加入100mL的水样；在10支装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管里（装有小试管）加入10mL水样。摇匀，培养。

（2）平板分离

接种伊红美蓝，培养、观察；典型菌落形态：黑紫色或红紫色，具有金属光泽。

（3）复发酵试验

进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，培养，观察。

（4）查表：1000mL水样中大肠菌群的MPN值。

八、生活饮用水微生物检验方法

（一）采样

1采样容器应采用洁净、无色、无毒的聚乙烯塑料和硬质玻璃（又称硼硅玻璃）。样品瓶必须专瓶专用，切不可用实验室盛装过浓溶液的瓶作采样瓶。通常我们使用500ml的高压灭菌的细口瓶采样。

2容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度。

3检验中所用的一切用品必须是完全灭菌的。在灭菌前应彻底洗涤干净，121℃高压蒸汽灭菌20min，或160℃干烤2h。

4冷藏，4h内检测。如有游离余氯应在采样瓶消毒前每125ml加01ml硫代硫酸钠溶液。

（二）细菌总数（操作步骤同茶具，记得做空白对照）

（三）总大肠菌群

1乳糖发酵试验

（1）10mL水样加入10mL双料乳糖发酵管中；1mL水样加入10mL单料乳糖发酵管中； 01mL水样加到10mL单料乳糖发酵管中；每一稀释度接种5管。

（2）37℃培养24小时，观察产酸产气现象

2分离培养（接种伊红美蓝，培养）

3证实实验（革兰氏染色，镜检，接种乳糖发酵管）

4结果报考：查表。

（四）耐热大肠菌群

1培养基：EC培养基

2操作步骤：同大肠菌群多管发酵法。

3培养温度：445℃培养24h。

（五）大肠埃希氏菌

1培养基：EC-MUG培养基（培养基加热溶解后要先在366nm紫光下检查有无荧光）

2培养温度：445℃培养24h。

3观察：在暗处用366nm的紫外灯照射，是否有蓝色荧光产生；

4计算阳性管数，查表得出最可能数，结果以MPN/100mL报告。

九、公共场所集中空调系统

（一）冷凝水、冷却水中嗜肺军团菌

（1）采样

1采样容器：可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶，广口瓶，用前灭菌。

2采样量：每个采样点依无菌操作取水样（或沉积物、软泥等样品）约500ml。

3中和：经氯或臭氧等消毒的样品，采样容器灭菌前加硫代硫酸钠溶液中和。

4样品运输与贮存：样品最好2天内送达实验室，不必冷冻，但要避光和防止受热，室温下贮存不得超过15天。

（2）热处理：取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。

酸处理：取5ml洗脱样品，调pH至22，轻轻摇匀，放置5min。

（3）接种平板静置于浓度为25%的CO2培养箱中，35~37℃，观察到有培养物生成时，反转平板，孵育10d，注意保湿。

（4）观察

军团菌生长缓慢，易被其它菌掩盖，需每天在体式镜上观察。军团菌的菌落颜色多样，通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也能显深褐色、灰绿色、深红色；菌落整齐，表面光滑，呈典型毛玻璃状，在紫外灯下，部分有荧光。

（二）送风中细菌总数

以无菌操作，使用六级筛孔空气撞击式采样器，以空气流量为283L/min，在采样点采集5~15min。将采集细菌后的营养琼脂平皿置35~37℃培养48 h，计数菌落数。

（三）送风中真菌总数

采样方法同上将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养5~7 d，逐日观察并于第7 d 记录结果。若真菌数量过多可于第5d 计数结果，并记录培养时间，换算成cfu/m3。

（四）送风中β-溶血性链球菌

在血琼脂平板上形成灰白色，表面凸起，直径05mm~07mm的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光，菌落周边有溶血环；镜检为革兰氏阳性无芽孢杆菌，圆形或卵圆形，呈链状排列。

（五）风管内表面微生物检验

采样面积：每一点采样面积应为50cm2。

采样方法：刮拭法、擦拭法

细菌和真菌培养与计数方法同上

化妆品做质量检测需要准备好企业证明材料、样品到当地的技术监督局，填写技术监督局出具的表格。

之后将会按照以下质量检验的方法进行检验：

1全数检验；

2抽样检验。

根据产品的不同特点和要求，质量检验的方式也各不相同：

1按检验工作的顺序分，有预先检验，中间检验和最后检验。

2按检验地点不同，分为固定检验和流动检验。

3按检验的预防性可分为首件检验和统计检验。

其目的在于，保证不合格的原材料不投产，不合格的零件不转下工序，不合格的产品不出厂；并收集和积累反映质量状况的数据资料，为测定和分析工序能力，监督工艺过程，改进质量提供信息。

扩展资料：

质量检测的报告内容：

（1）原材料、外购件、外协件进厂验收检验的情况和合格率指标；

（2）产品出厂检验的合格率、返修率、报废率、降级率以及相应的金额损失；

（3）按车间和分小组的平均合格率、返修率、报废率、相应的金额损失及排列图分析；

（4）产品报废原因的排列图分析；

（5）不合格品的处理情况报告；

（6）重大质量问题的调查、分析和处理报告；

（7）改进质量的建议报告；

（8）检验人员工作情况报告。

报告的职能也就是信息反馈的职能。这是为了使高层管理者和有关质量管理部门及时掌握生产过程中的质量状态，评价和分析质量体系的有效性。

为了能做出正确的质量决策，了解产品质量的变化情况，必须把检验结果，用报告形式，特别是计算所得的指标，反馈给管理决策部门和有关管理部门，以便做出正确的判断和采取有效的决策措施。

-质量检验

在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水被生活废物污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。因此，结合大肠菌群数以判断水的污染源的安全程度就更全面。

我国现行《生活饮用水卫生标准》（GB5749--2006）规定：细菌菌落总数在1 mL自来水中不得超过100个。

细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。然而，在实际工作中却不易做到，所以通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。

水中细菌总数与水体受有机污染的程度成正相关。因此细菌总数常作为评价水体污染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。

扩展资料

自来水细菌菌落总数的测定：

以无菌操作方法，用无菌移液管吸取1 mL充分混匀的水样注入无菌培养皿中，倾注入已融化并冷却至50 ℃左右的营养琼脂培养基，平放于桌上迅速旋摇培养皿，使水样与培养基充分混匀，冷凝后成平板。每个水样倒三个平板。

另取一个无菌培养皿倒入培养基冷凝成平板作空白对照。将以上所有平板倒置于37 ℃恒温箱内培养24 h，计菌落数。算出三个平板上长的菌落总数的平均值即为1 mL水样中的细菌总数。

-细菌菌落总数

一，用灭菌容器盛接一千毫升水样，盖好容器。二，培养皿中加上事先制备好的伊红－美蓝培养基十五毫升，冷凝后待用。三，用醋酸纤维素虑膜过虑样品（水）四，完后，取虑膜（含细菌），放到培养基上，使虑膜与培养基完全贴紧，不能有气泡。五，培养基放在三十七度下培养二十小时。六，根据滤膜出现的深紫色菌落数日（即为大肠杆菌个数）得出结论。

一、水样的采集与送检

(一)供卫生细菌学检验用的采样瓶事先必须洗净，瓶口包扎进行灭菌，并需

保证在装运、保存过程中不受污染。

(二)在采自来水水样时，先用酒精灯或煤气灯将水龙头烧灼消毒，然后将水

龙头完全打开，放水5~10min，以排除管道内的贮存水后再采水样。经常使用的水龙头放水

1~3min

即可采集水样。采水量为瓶容量的80%左右，以便在检

验时可充分摇动混匀水样。

(三)收集含余氯的水样时，则采样瓶未灭菌前按每采500ml

水样加入15%硫

代硫酸钠溶液2ml

的量预先加入采样瓶内，然后在lO13kPa

下20min

高压灭

菌，用于采样后中和水样中的余氯，终止余氯的后续杀菌作用。

(四)取江、河、湖、水库等水源的水样时，应选择有代表性的地点及水质可

疑的地方，一般应在距水面10~15cm

深处取样。采集具有抽水设备的井水，应

先抽水约5min，除去管线中贮留的水。

(五)采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等项目，并应从速检验，

一般从采集到检验不应超过2h，条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不

应超过4h。

二、菌落总数的测定

菌落总数是指

lml

水样在普通营养琼脂培养基中，经37℃24h

培养后，所生

长的细菌菌落的总数。菌落总数主要作为判定水质被污染程度的标志之一。我国规定生活饮用水卫生标准为

lml

水中的茵落总数不超过100。

(一)生活饮用水菌落总数的测定

仪器设备和试剂

1仪器设备恒温培养箱。

2器材

lml

无菌吸管1

支、无菌平皿3

个、营养高层琼脂3

支等。以上材

料用量均以一个水样计算。

操作步骤

(1)将水样用力震摇20~25

次，使可能存在的细菌凝团得以分散。

(2)以无菌操作法吸取lml

充分摇匀的水样，注入无菌平皿中，倾注15ml~20ml

已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂于上述平皿中，并立即旋转平皿，使

水样与琼脂充分混匀。每个水样应同时做2

个平皿，另取一个平皿只倾注营养琼

脂作空白对照。

(3)待平皿内琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置37℃培养24h

后

取出，计数平皿内菌落数目，两个平板中平均菌落数即为lml

水样中的菌落总数。

结果分析与报告

以下内容适用于生活饮用水和水源水的分析和报告。

1菌落计数及报告方法作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放

大镜检查，以防遗漏。在记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均茵

落数，供下一步计算时应用。在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较

大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状茵落生长的平板作为该稀释度的

平均菌落数。若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，

则可数此一半平板上的细菌菌落数乘以2

代表全平板菌落数，然后再求该稀释度

的平均菌落数。