本次阅读的文献，13年发表在《current biology》上的《Three MYB Transcription Factors Control Pollen Tube Differentiation Required for Sperm Release》的文章，通讯作者是美国布朗大学的Mark A Johnson教授，本文发现了三个作用于雄方的MYB类转录因子参与调控花粉管的接收过程，这篇文章值得一提的是，用到了很多荧光材料来解决生物学问题。此外，中国农业大学的叶德教授也随后在《plos genetic》上发表了《MYB97, MYB101 and MYB120 Function as Male Factors That Control Pollen Tube-Synergid Interaction in Arabidopsis thaliana Fertilization》的文章，也是类似工作，叶德老师还是很厉害的，都能关注到很棒的基因，例如前几天看到一篇博士论文做到的MRAIS,这个基因RNA-seq表达量不算很高，但是他们也关注到了，可惜也是别人先发表了。
这篇文章是一个典型的反向遗传学的思路，由于我们知道体外生长的花粉管转录组与通过雌蕊组织生长的花粉管转录组会存在差异，因为花粉管会存在一个类似于精子获能的过程来获得花粉管导向的能力，于是乎他们就想找到在雄方特异的表达的转录因子。于是他们关注到了MYB120,通过演化树发现，还有两个亲缘关系很近的转录因子MYB97,MYB101也是在雄方特异表达。于是要我说做个三突看表型吧！
将文章的时候先观察了这三个转录因子的表达pattern。MYB101可以看到主要是定位在营养细胞和花粉管中，MYB97只能在穿过柱头后的营养细胞中表达，MYB120的也是在穿过柱头的营养细胞中表达，但是很弱。三个转录因子亚细胞定位的一致性很好。
然后观察突变体的表型吧，于是拿到MYB97,MYB101,MYB120的T-DNA插入突变体，发现单突，双突都没有败育表型，三突有了。表型有了问题就好办了。拿到多突后验证冗余性最好的办法就是做互补，任意补一个发现表型恢复了。于是乎下面最重要的问题就是到底哪个方面出了问题：花粉发育？花粉萌发？花粉管导向？花粉管接收？配子融合？利用三突突变体一个个尝试这些过程。利用DAPI染色发现花粉发育没有问题。通过带有LAT52:GFP的三突材料进行体外或者半体外培养，发现花粉管的萌发和生长不存在问题。然后将LAT52：GFP的三突材料与MS1的材料做杂交，看花粉管导向胚珠的情况，发现很多情况下，花粉管并不爆炸，成卷曲状。
随后用HTR10:HTR10:mRFP标记三突精细胞的核，用ACT11:MSI1:GFP标记雌方的细胞核。两者杂交，发现精细胞不与雌配子融合，且出现多花粉管事件。这些数据说明了配子融合的过程并没有发生，且导向也不存在问题。
为进一步讨论突变体影响的过程。作者用雌方用ACT11:MSI1:GFP标记，雄方花粉管用 LAT52:dsRed标记杂交，发现突变体花粉管出现过度生长的表型，且出现两根花粉管同时进入的现象。
至此表型分析就到位了。由于发现了这三个转录因子的作用于是他们就想找下游吧。于是通过微阵列实验找啊找，于是乎他们用突变体的花粉以及WT的花粉管分别受给MS1，8h后观察提取雌蕊看表达差异，发现有45基因在MYB3突中表达量下调，3个基因显著上调，这里面有CHX家族成员和pectin裂解酶，例如有报道CHX21/23就参与了花粉管的导向和接收过程而果胶是花粉管外壁组成成分。于是作者就选了11个表达量下降4倍以上的基因。观察他们的表达pattern，发现这些基因也是在穿过柱头的花粉管中表达量才开始增加。q-RT pcr的方法进一步证明了这11个基因表达量的下降。其中这些差异表达基因中有很多值得关注地方，例如存在酶，跨膜蛋白以及分泌小肽。于是作者就找了一个小肽THIONIN，观察了其作用。发现早期在花粉表达不高，但是在半体外的花粉管中存在胞质当中，暗示其可能作为myb转录因子的下游起作用。
这篇文章是一片典型的反向遗传学的经典文章，思路清晰明了。数据做的也很扎实，就是在找下游的时候，能否通过chip和RNA-seq连用的话，找下游的基序，表达量变化差异大，且在花粉管穿过柱头后特异的表达，结合这三个条件，数据筛选放松一些，也许能够筛选到很多有意思的结果。
此外，简单介绍一下叶德老师的工作。因为MYB类转录因子广泛参与了植物各个生物学过程，叶德老师是单纯MYB类转录因子对于生殖作用的影响出发，筛选出在花粉和花粉管表达量的Myb，发现MYB33, MYB65, MYB81, MYB97, MYB101, MYB104 和 MYB120，然后利用q-RT PCR确定了97,101,120仅仅在花粉和花粉管表达，其他组织表达很低，而其他表达很广谱，于是乎关注到了这个基因。于是先接个gus看表达pattern。发现表达蛮特异的。
然后买了T-DNA插入的单突构建myb3突，发现存在败育，且单个基因做回补，没问题。正反交实验发现雄方问题。苯胺蓝染色发现花粉管在过度生长，同时没有释放精细胞确定表型。他们也筛选了MYB3突的下游，发现存在24个差异表达基因。选择了其中三个下调8倍的基因，但是没有具体说是啥，验证了这三个基因与三个myb之间是存在互作的。两篇文章出发点不同，但是思路基本差不多，所以有好的基因赶紧做吧。
1 关于傲娇的诗句
关于傲娇的诗句 1 关于不能骄傲的诗句
山外青山楼外楼，强中自有强中手
黑发不知勤学早，白首方悔读书迟
成绩是谦虚者前进的阶梯，也是骄傲者后退的滑梯。
杰弗逊： 对骄傲的人不要谦虚，对谦虚的人不要骄傲。
蒙古： 骄傲跌在门坎，谦虚走遍天下。
斯宾塞： 科学的自负比起无知的自负来还只能算是谦虚。
朱尔·勒纳尔： 可能有虚伪的谦虚，但绝没有虚伪的骄傲。
贺拉斯： 谦虚常被误认为是隐讳，沉默常被误认为是怪癖。
谦虚的人常思己过，骄傲的人只论人非。
谦虚的人学十当一，骄傲的人学一当十。
苏联： 谦虚几乎总是和才能成正比例。
切斯特菲尔德： 谦虚是沽名钓誉的诱饵。
泽曼德斯： 谦虚是美和德的堡垒。
亨·菲尔丁： 谦虚是映照功德的烛光。
绪儒斯： 谦虚这种品质是教不会的，而是与生俱来的。
拉布吕耶尔： 谦虚之于功德，犹如阴影之于绘画，前者使后者脱颖而出。
雷锋： 青春啊，永远是美好的，可是真正的青春，只属于那些永远力争上游的人，永远忘我劳动的人，永远谦虚的人！
屈已者能处众，谦虚者能处身。
美国： 缺少谦虚就是缺少见解。
随和可能伴随着自卑，好胜可能伴随着骄傲，谦虚可能伴随着平庸，坚定可能伴随着武断。
心偏小人常戚戚，礼多君子屡谦虚。
华罗庚： 虚伪的谦虚，仅能搏得庸俗的掌声，而不能求得真正的进步。
让·保·里克特： 一个人在受到责备而不是受赞扬之后仍然保持谦虚，那才是真正的谦虚。
英国： 用慷慨激昂的言语攻击傲慢并不是谦虚的标志。
英国： 真正的谦虚，为一切美德之母。
柏格森： 真正的谦虚只能是对虚荣心进行了深思以后的产物。
朝鲜： 知识浅薄者骄傲，学识渊博者谦虚 知识深藏在谦虚的大海里。
朝鲜： 知识深藏在谦虚的大海里。
赫尔岑： 只有坚强的人才谦虚。
高尔基： 智慧是宝石，如果用谦虚镶边，就会更加灿烂夺目。
最谦虚的人，是最有出息的人
成绩是谦虚者前进的阶梯，也是骄傲者后退的滑梯。
杰弗逊： 对骄傲的人不要谦虚，对谦虚的人不要骄傲。
蒙古： 骄傲跌在门坎，谦虚走遍天下。
斯宾塞： 科学的自负比起无知的自负来还只能算是谦虚。
朱尔·勒纳尔： 可能有虚伪的谦虚，但绝没有虚伪的骄傲。
贺拉斯： 谦虚常被误认为是隐讳，沉默常被误认为是怪癖。
谦虚的人常思己过，骄傲的人只论人非。
谦虚的人学十当一，骄傲的人学一当十。
苏联： 谦虚几乎总是和才能成正比例。
切斯特菲尔德： 谦虚是沽名钓誉的诱饵。
泽曼德斯： 谦虚是美和德的堡垒。
亨·菲尔丁： 谦虚是映照功德的烛光。
绪儒斯： 谦虚这种品质是教不会的，而是与生俱来的。
拉布吕耶尔： 谦虚之于功德，犹如阴影之于绘画，前者使后者脱颖而出。
雷锋： 青春啊，永远是美好的，可是真正的青春，只属于那些永远力争上游的人，永远忘我劳动的人，永远谦虚的人！
屈已者能处众，谦虚者能处身。
美国： 缺少谦虚就是缺少见解。
随和可能伴随着自卑，好胜可能伴随着骄傲，谦虚可能伴随着平庸，坚定可能伴随着武断。
心偏小人常戚戚，礼多君子屡谦虚。
华罗庚： 虚伪的谦虚，仅能搏得庸俗的掌声，而不能求得真正的进步。
让·保·里克特： 一个人在受到责备而不是受赞扬之后仍然保持谦虚，那才是真正的谦虚。
英国： 用慷慨激昂的言语攻击傲慢并不是谦虚的标志。
英国： 真正的谦虚，为一切美德之母。
柏格森： 真正的谦虚只能是对虚荣心进行了深思以后的产物。
朝鲜： 知识浅薄者骄傲，学识渊博者谦虚 知识深藏在谦虚的大海里。
朝鲜： 知识深藏在谦虚的大海里。
赫尔岑： 只有坚强的人才谦虚。
高尔基： 智慧是宝石，如果用谦虚镶边，就会更加灿烂夺目。
最谦虚的人，是最有出息的人。
2 关于不能骄傲的诗句
1自卑虽是与骄傲反对，但实际却与骄傲最为接近。
——斯宾诺莎2骄傲会使人倒霉，骄傲后面往往紧跟着毁灭和羞辱呢。——维克多·雨果《巴黎圣母院》3我悲伤而又骄傲，悲伤的是这个世界上没有人理解我，骄傲的是我不需要别人的理解。
——温瑞安4因为我太骄傲了，就像枯叶蝶，骄傲是我的保护色。一旦失去保护色，我就活不成了，你知道吗！——琼瑶《花非花雾非雾》5因为怯懦，所以逃避生命，以不抵抗在最黑暗的沉沦中生出骄傲，因为骄傲，所以不选择生，所以拒斥粗鄙的乐观主义。
——太宰治《人间失格》6要一个骄傲的人看清他自己的嘴脸，只有用别人的骄傲给他做镜子；倘若向他卑躬屈膝，不过添长了他的气焰，徒然自取其辱。——莎士比亚《李尔王》7灼伤的青春，也值得骄傲吗。
——八月长安《橘生淮南·暗恋》。
3 傲娇的句子有什么
我，我才不会这样子！真正的我从来不是傲娇！傲，傲娇什么的，都，都是别人杜撰！嗯，一点，一点也没有呢！
我……我……才不是傲娇呢！
我只是刚好路过而已，才不是特地来看你的呢！
我可不是因为喜欢才这样做的哦！
总之你是个大笨蛋啦！
全世界我最讨厌你了！
笨、笨蛋，人家可不是特地来帮你们的呢！
这……这种问题，我当然知道，我……我可不是要说给你听的，我只是觉得你不知道的话太可怜了……对，就是这样……所以给我认认真真的记住！！
其实我也不是很想要这个……如果你硬要给我，我就勉为其难的收下了
才。才不是特别为你做的呢！
xx什么的。最讨厌了！
什么啊就算你夸我我也不会高兴的！
啰。啰嗦！
哼既然你都这么说了，那我就勉为其难。。
谁。谁让你做这些多余的事啦！
你不告诉我我也知道的！
够了！人家才不是专程来看你呢！只是路过而已别以为就……
源网站：/linkurl=UMyB_ZlnfN3DOhlnrbr94Dte7kDmjgNu_PcF0BzV4XKjtNo69_BHRKl9hpuLAU2cTluqcg4ZvM0jdXGfQcnSI_
4 关于高傲的句子
人不可有傲气，但不可无傲骨。——徐悲鸿
傲骨不可无，傲心不可有。无傲骨则近于鄙夫，有傲心不得为君子。
虚心使人进步，骄傲使人落后。
风险越大，甘冒风险的自傲感也越强。
如果说满足女性的骄傲能使男性无限喜悦的话，那么伤害男性的骄傲则能使女人欣喜若狂。
唯有对自己卓越的才能和独特的价值有坚定不可动摇之确信的人才被称为骄傲。
眼睛象海水一样，整个人看起来懒洋洋的，淡淡的。她在微笑，而眼珠却无比淡漠，神秘而纯洁。
她嘴角微撇着，眼睛斜视，不屑冷冷的双臂半搭着，拒人于千里之外的冷漠，眼角和眉梢都染上妩媚的骄傲和讽刺褒义：她像朵亭亭玉立的郁金香，高贵典雅，从眼睛透出的和煦而又淡漠的光，让人不敢侵犯。
从蛹破茧而出的瞬间，是撕掉一层皮的痛苦彻心彻肺很多蝴蝶都是在破茧而出的那一刻被痛得死掉了。
要理想不要幻想，要激情不要矫情。凡事知足常乐。
那些刻在椅背后的爱情会不会像水泥地上的花朵开出地老天荒的没有风的森林。
全世界的人都离开你了我也会在你身边，有地狱我们一起猖獗。
天空的飞鸟，是你的寂寞比我多，还是我的忧伤比你多，剩下的时光，你陪我，好不好，这样你不寂寞，我也不会忧伤……
灯影浆声里，天犹寒水犹寒，梦中丝竹轻唱：楼外楼，山外山，楼山之外人未还。人未还，雁字回首，早过忘川。抚琴之人泪满衫，萧萧扬花落满肩，落满肩，笛声寒，窗影残，烟波桨声里，何处是江南。
牵着你的手，无论是在哪里，我都感觉像是在朝天堂奔跑。
我哒哒的马蹄是个美丽的错误，我只是过客，不是归人
“我一直以为山是水的故事，云是风的故事，你是我的故事，可是却不知道，我是不是你的故事”。
如果可以和你在一起，我宁愿让天空所有的星光全部损落，因为你的眼睛，是我生命里最亮的光芒。
大提琴的声音就象一条河，左岸是我无法忘却的回忆，右岸是我值得紧握的璀璨年华，中间流淌的，是我年年岁岁淡淡的感伤！
你永远也看不到我最寂寞时候的样子，因为只有你不在我身边的时候，我才最寂寞。
那些以前说着永不分离的人，早已经散落在天涯了。
时光没有教会我任何东西，却教会了我不要轻易去相信神话。
一只野兽受了伤，它可以自己跑到一个山洞躲起来，然后自己舔舔伤口，自己坚持，可是一旦被嘘寒问暖，它就受不了。
5 关于芦荟傲娇的诗句
蟾酥迅散疔毒气，象胆（芦荟）寒生目障光。
体貌无佳处，龙舌四季鲜。伊人常养莳，岂止供观瞻。
几盆窗户下，春至似从戎。怒叶丛刀戟，青光闪剑锋。
锦屏谁不爱？烂漫我心同。瞄准荒芜处，欲飞三箭红。
数盆窗牖下，春至似从戎。怒叶丛刀戟，青光闪剑锋。
锦屏谁不爱？烂漫我心同。瞄准荒芜处，欲飞三箭红。
茵茵菱草绿葭槎，齿叶生生缀嫩芽。细雨芳园幽碧翠，微风山野蕴烟纱。
浮生一味平添美，出世无容也尚嘉。千古红颜终是梦，清霄星览月辉斜。
头尖肉厚伞形葩，饮誉庭园百万家。齿刺叶生防辣手，圆锥花序染芳华。
蜈蚣掌作颜霜用，芦荟瓣能医毒邪。食用美容皆尚品，攸然自信享流霞。
习惯绿衣弹管弦，春风恩赐竟忘禅。 素颜一茎香虽浅，浊念千番梦未偏。
借此偿情追往昔，欠君还爱许流年。 空花已带前生意，我是知音认旧缘。
芦荟：常绿、多肉质的草本植物。叶簇生，呈座状或生于茎顶，叶常披针形或叶短宽，边缘有尖齿状刺。
花序为伞形、总状、穗状、圆锥形等，色呈红、黄或具赤色斑点，花瓣六片、雌蕊六枚。花被基部多连合成筒状。
芦荟的品种至少有300种以上，其中非洲大陆就有250种左右，马达加斯加大约有40种，其余10种分布在阿拉伯等地。芦荟各个品种性质和形状差别很大 有的像巨大的乔木，高达20米左右，有的高度却不及10厘米，其叶子和花的形状也有许多种，栽培上各有特征，千姿百态，深受人们的喜爱。
芦荟本是热带植物，生性畏寒，但也好种活。别 名：油葱，卢会，讷会，象胆，奴会，劳伟。
芦荟花语：青春之源，自尊又自卑的爱。花箴言：爱的伤痕正是爱的记号。
1《药性论》：杀小儿疳蛔。主吹鼻杀脑疳，除鼻痒 。
2《海药本草》：主小儿诸疳热。3《开宝本草》：主热风烦闷，胸膈间热气，明目镇心，小儿癫痫惊风，疗五疳，杀三虫及痔病疮痿。
解巴豆毒。 4《本草图经》：治湿痒，搔之有黄汁者；又治NI齿。
5《得配本草》：散瘰疬，治惊痫，利水除肿。 6《本草再新》：治肝火，镇肝风，清心热，解心烦，止渴生津，聪耳明目，消牙肿，解火毒。
7《现代实用中药》：为峻下药，有健胃通经之效。 8《本草经疏》：芦荟，寒能除热，苦能泄热燥湿，苦能杀虫，至苦至寒，故为除热杀虫之要药。
其主热风烦闷，胸胁间热气，明目，镇心，小儿癫痫凉风，疗五疳，杀三虫者，热则生风，热能使人烦闷，热除则风热烦闷及胸膈间热气自解。凉肝故明目。
除烦故镇心。小儿癫痫惊风，热所化也，五疳同为内热脾胃停滞之证；湿热痔病疮痿，亦皆湿热下客肠脏，致血凝滞之所生，故悉主之。
能解巴豆毒，亦除热之力。 9《本草汇言》：卢会，凉肝杀虫之药也。
凡属肝脏为病，有热者，用之必无疑也。但味极苦，气极寒，诸苦寒药无出其右者。
其功力主消不主补，因内热气强者可用，如内虚泄泻食少者禁之。 10《本经逢原》：芦荟，入厥阴肝经及冲脉。
其功专于杀虫清热。冲脉为病，逆气里急及经事不调，腹中结块上冲，与小儿疳热积滞，非此不除。
同甘草为末，治头项顽癣甚效。但大苦大寒，且气甚秽恶，若胃虚少食人得之，入口便大吐逆，每致夺食泄泻，而成赢瘦怯弱者多矣。
11《要药分剂》：近世以芦荟为更衣药，盖以其清燥涤热之功也。 翠涛轩 五月二十八日重过翠涛轩，清坐终日，薄暮而归，赋此盖书所见也，翠涛为芦荟而得名，余不能辞矣。
幽人爱芦荟不吃笋，养得修篁个个长。五月六月雨不落，千枝万枝风自凉。
苍雪逼人时展簟，翠涛惊梦午移床。涓涓清润乌皮几，楚楚高搀薜荔墙。
密影扫阶敷琐碎，馀音拂水度笙璜。孙枝迸地浑疑占，老节凌霜色更苍。
三径旋开真得计，七贤避世故佯狂。因怀梅友称三绝，却笑荷花似六郎。
白鹤归时云动荡，青鸾啸处夜微茫。对之可使食无肉，衰矣空惭鬓有霜。
隐几无心开卷帙，卷帘随意炷炉香。日中见斗瞻霄汉，月下吹箫引凤凰。
物外襟怀差可共，闲中滋味淡相忘。不寻酒伴鸡豚社，误落诗名锦绣坊。
时复开樽排合匝，每怜学子走 。兴来坐久无聊赖，老去频过也不妨。
他日成材惟汉简，於今触目尽琳琅。振衣散策归来后，江路迢迢又夕阳。
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