组培实验室一般有哪几个部分组成，各部分的功能

组织培养室设计由缓冲间、准备室、无菌间、培养室和炼苗室五个区室组成。

1、缓冲间：进入实验室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入实验室杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。

2、无菌间：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要仪器设备：超净工作台。

3、培养室：是将接种的材料进行培养生长的场所。其大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。主要仪器设备：培养架和光照培养箱。

4、炼苗室：主要用于对无菌幼苗强行锻炼的场所，使其定植后能够迅速适应露地的不良环境条件。

整个实验室均以塑钢玻璃隔断，须封顶并加装空调，墙面需改造成为墙漆覆盖，天花板要选择光滑无灰尘的材质。

扩展资料

由于组织培养过程中器皿的重复利用，特别是培养基中有机物质及培养组织分泌物的附着，影响再次培养，导致实验结果发生误差，甚至使培养组织受到毒害。同时，一些新制玻璃器皿，都部分的存在碱性游离物，也影响到实验结果的准确性。

因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，使其达到不留任何残留物的要求。因不同培养器皿的材料、结构、使用方法不同，清洗的方法也不同。

—北京市海淀区植物组织培养技术实验室

这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用

大量元素(母液Ⅰ) mg/L

NH4NO3 33 000

KNO3 38 000

CaCl2·2H2O 8 800

MgSO4·7H2O 7 400

KH2PO4 3 400

微量元素(母液Ⅱ)

KI 166

H3BO3 1 240

MnSO4·4H2O 4 460

ZnSO4·7H2O 1 720

Na2MoO4·2H2O 50

CuSO4·5H2O 5

CoCl2·6H2O 5

铁盐(母液Ⅲ)

FeSO4·7H2O 5 560

Na2-EDTA·2H2O 7 460

有机成分(母液Ⅳ)

ⅣA　肌醇 20 000

ⅣB烟酸 100

盐酸吡哆醇(维生素B6) 100

盐酸硫胺素(维生素B1) 100

甘氨酸 400

以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液其中,

母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至55,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中

MS培养基中还需要加入：2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(01 mg/mL)其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为01 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为01 mg/mL的母液

配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL再取2,4-D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中

1 无机营养物

无机营养物即无机盐是植物生长发育所必需的，根据植物对无机盐需要的多少，将其分为大量元素和微量元素。

11 大量元素

大量元素在植物体内含量占干物重的01-10%，其浓度一般大于05mmol/L，包括氮（N）、磷（P）、钾（K）、钙（Ca）、镁（Mg）、硫（S），若加上碳（C）、氢（H）、氧（O），则有9种元素。

在离体培养中，其C、H、O三元素是从人工加入的糖类获得的，H、O元素也可以从培养基所含的水分中获得，而其余6种矿质元素要从加入的适量的无机盐类来获取。

无机氮常以硝态氮（如KNO3）和铵态氮（如NH4NO3）两种形式供应，多数培养基都是二者兼而有之。

12 微量元素

植物所需的微量元素包括铁（Fe）、硼（B）、锰（Mn）、铜（Cu）、锌（Zn）、钼（Mo）、氯（Cl）等。

植物对其需要量极微，在植物体内含量占干物重的001%以下，起生长发育所需的浓度一般小于05mmol/L，稍多则产生毒害。

碘（I）虽不是植物生长的必需元素，但几乎在所有的培养基中都含有碘元素，有些培养基还加入了钴（Co）、镍（Ni）、钛（Ti）、铍（Be），甚至铝（Al）等元素。

13 铁盐

铁是用量较多的一种微量元素，是许多重要氧化还原酶的组成成分，在植物叶绿素的合成过程中起到重要的作用。

若以硫酸铁和氯化铁为供铁源，培养基的pH值会达到52以上，形成氢氧化铁沉淀，使培养物无法吸收而出现缺铁症，故在培养基配制时，常用硫酸亚铁和EDTA二钠配成螯合态铁，成为有机态铁方被培养物吸收和利用；也可用EDTA铁盐，作为铁的供应源。

这些元素参与培养物机体的建造，构成植物细胞中的核酸、蛋白质、叶绿体、酶系统和生物膜所必需的元素。

2 有机营养成分

在配制培养基时，不仅要加入无机营养成分，还要加入一定量的有机营养物质，以利于培养物的生长和分化。

21 糖类

在组织快繁中，被培养的培养物大多不能进行光合作用，能进行的也不能满足其对糖类的需求，因此必须在培养基中添加糖作为碳源和能源，同时对维持培养基一定的渗透压也有重要作用。

最重要的碳源是蔗糖，其浓度一般为2%-3%。葡萄糖和果糖也是较好的碳源。在大规模工厂化生产中，为了降低生产成本，可用市售的白砂糖代替蔗糖，也有同样的效果。

22 维生素

维生素常以辅酶形式参与生物催化剂——酶系的活动，以及参与细胞的蛋白质代谢、脂肪代谢、糖代谢等重要生命活动。

在组培中以B族维生素为主，常使用盐酸硫胺素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）、烟酸（维生素B3）、钴胺素（维生素B12）、叶酸（维生素Bc）、生物素（维生素H）、抗坏血酸（维生素C）等，一般使用浓度为01-10mg/L。

23 肌醇（环己六醇）

在组培中，肌醇本身不直接促进培养物的生长，可有助于活性物质作用的发挥，提高维生素B1的效果，参与碳水化合物代谢、磷脂代谢和离子平衡作用，从而促进培养物的生长和胚状体及芽的形成。在配制培养基时，肌醇通常使用浓度为50-100mg/L。

24 氨基酸

在培养基中要加入一种或数种氨基酸，最常使用的是甘氨酸（Gly），有时用到丝氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）、谷氨酰胺（Gln）、天冬酰胺（Asn）等，作为重要的有机氮源。

甘氨酸能促进离体根的生长，对其培养物的生长有良好的促进作用，通常用量为2-3mg/L。

有时也采用水解乳蛋白（LH）或水解络蛋白（CH），它们是牛乳用酶法等加工而成的水解产物，是含有约20种氨基酸的混合物，通常用量为500mg/L。

25 有机附加物

在组培中，人们发现在培养基中添加一些天然的有机物或提取物对培养物的增殖和分化有明显的促进作用。

例如椰乳（CM），一般用量为10%-20%（或100-150mg/L）；酵母提取物为05%；番茄汁为5%-10%；香蕉泥为100-200mg/L；马铃薯用量为150-200g/L，去皮和去芽后，煮30分钟，再过滤，即可加入培养基中。

马铃薯、香蕉泥具有较大的pH缓冲作用。这些天然有机物的作用是为培养物提供一些必要的营养成分、生理活性物质和生长激素等。但由于这些天然有机物成分较复杂，且难确定，含量又不稳定，所以应尽量避免使用。

3 植物生长调节物质

在组培中，为了促进培养物生长和器官分化，其培养基除加入营养物质外，还必须加入一种或多种植物生长调节物质、生长调节物质（植物激素）是培养基中的关键物质，在组培中起着决定的作用。一般常用生长素和细胞分裂素类。

我们将在后期专门安排一期介绍植物生长调节物质的在组培中的作用。

31 生长素类

组培中，生长素类的作用是诱导愈伤组织的形成，胚状体的产生以及试管苗的生根，更重要的是细胞分裂素配成一定的比例诱导腋芽及不定芽的产生。

生长素类常用的有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）。2,4-D一般用于初代培养，启动细胞脱分化，而再分化阶段往往不用2,4-D，而用NAA、IBA、IAA；在生根诱导中一般多用IBA。

32 细胞分裂素类

在进行组培中，常将细胞分裂素和生长素配合使用，即细胞分裂素与生长素的比例大时，促进芽的形成，这时细胞分裂素起到主导作用；比例小时，则有利于根的形成，这时生长素起主导作用。培养基中的细胞分裂素与生长素之间的比例是决定器官分化的关键。

细胞分裂素类常用的有：激动素（KT）、6-苄氨基嘌呤（6-BA/BA/BAP）、玉米素（ZT）、2-异戊烯腺嘌呤（2-ip）、吡效隆（CPPU）和噻重氮苯基脲（TDZ）。但在组培中通常使用人工合成的6-BA和KT，因他们性能稳定且价格适中。

4 琼脂

依据态相不同，培养基分为固体培养基和液体培养基，其区别在于加入琼脂与否，若加入琼脂便形成胶体状态的固体培养基，而不加则为液体培养基。

琼脂是最好的固化剂，他是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，在培养基中本身不具营养，它的主要作用是使培养基在常温下凝固，一般使用量为06-10%。

培养基的pH值偏酸，高压灭菌时间过长，温度过高均会影响其凝固力。琼脂一般以色浅、透明、洁净为好，新买来的琼脂要先试验一下它的凝固能力，以便确定其适宜的用量。

5 活性炭

在培养基中加入活性炭（AC），其目的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的不利影响，同时也创造暗环境，对某些植物诱导生根有利。

一般认为活性炭之所以有强大的吸附能力，主要是通过氢键、范德华力等作用力，把有毒物质从外植体周围吸附掉。

活性炭除了有吸附作用外，在一定程度上还降低光照强度，从而减轻褐变。

但是，活性炭对物质的吸附无选择性，既吸附有毒酚类的同时，又吸附培养基中的有利物质，如生长调节物质、维生素B6、叶酸、烟酸等，并且在不同植物的组培中有效程度不一。因此，在决定使用活性炭时应先试验再确定是否采用，通常使用浓度01%-05%。