胃蛋白酶原1和胃蛋白酶原2有什么区别

胃蛋白酶原1和胃蛋白酶原2有什么区别,第1张

1、具体性质

胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体,根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群,1-5组分的免疫原性相同,称为胃蛋白酶原I,主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌;组分6和7被称为胃蛋白酶原II

2、检测

胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ检测试剂盒分别用于检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的含量。

3、血清活检意义

PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针,胃酸分泌增多PGI升高,分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低;PGII与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜),其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关。

PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此,联合测定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。

-胃蛋白酶原

我知道的也不是很全,简单跟你说说吧

最常见的是蛋白激酶A(PKA),可以搜一下,PKA全酶由4个亚基组成(R2C2),包括两种亚基,即对cAMP高亲和力的调节亚基(R),和催化亚基(C)。在没有cAMP时,调节亚基和催化亚基形成无酶活性的R2C2复合体。PKA可被10nmol/L的cAMP激活,每2分子cAMP与每1个调节亚基结合导致R2C2解离成1个R2亚基和2个C亚基。然后自由的催化亚基具有了酶活性。cAMP与调节亚基的结合解除了对催化亚基的抑制作用。

蛋白质提取方法-------列举10种方法

一、植物组织蛋白质提取方法(summer)

1、根据样品重量(1g样品加入35ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4、提取上清夜,样品制备完成。

蛋白质提取液:300ml

1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml

2、甘油(Glycerol)75ml

3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g

这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!

二、

植物组织蛋白质提取方法 (summer)

三氯醋酸—丙酮沉淀法

1、在液氮中研磨叶片

2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮(含007%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1 小时),然后真空

干燥沉淀,备用。

4、上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小

时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。

药品:

提取液:含10%TCA 和007%的β-巯基乙醇的丙酮

裂解液:27g 尿素02gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M 的

DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!

三、

组织:肠黏膜 (newinbio)

目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达

应用TRIPURE 提取蛋白质步骤:

含蛋白质上清液中加入异丙醇:(15ml每1mlTRIPURE用量)

倒转混匀,置室温10min

离心:12000 g,10min,4度,弃上清

加入03M盐酸胍/95%乙醇:(2ml每1mlTRIPURE 用量)

振荡,置室温20min

离心: 7500g,5 min,4 度,弃上清

重复03M盐酸胍/95%乙醇步2 次

沉淀中加入100%乙醇 2ml

充分振荡混匀,置室温20 min

离心: 7500g,5min,4度,弃上清吹干沉淀

1%SDS溶解沉淀

离心:10000g,10min,4度

取上清-20 度保存(或可直接用于WESTERN BLOT)

存在的问题:加入1%SDS 后沉淀不溶解,还是很大的一块,4 度离心后又多了白色沉定,SDS 结晶?测

浓度,含量才1mg/ml左右。

解决:提蛋白试剂盒,另外组织大小适中,要碎,立即加2X BUFFER,然后煮5-10分钟,效果很好的。

四、

lysis solution:(yog)

Protein extraction buffer (Camiolo buffer):

100 ml= (0075M Potassium Acetate) 0736g

(03M) NaCl 1753g

(01M) L-arginine basic salt 1742g

(001M) EDTA-HCl 0292g

(025%) Triton X-100 250 ul

up to 100 ml with dH20 pH 74 Then 02 um filter

1 Freeze tissue in liquid nitrogen

2 Rinse in PBS then mince

3 Add 1 ml Camiolo extraction buffer per 100 mg of tissue

4 Homogenize for 1 minute at 4\\'C

5 Spin at 3,000 rpm/15 minutes/4\\'C

6 Remove supernatant and save in another tube

7 If necessary, dialize the supernatant against PBS with

50mM/L Tris-HCl pH 74

五、

植物材料:水稻苗,叶鞘,根(ynibcas)

1、200 毫克样品置于冰上磨碎

2、加lysis buffer,离心,10000rpm,4度,5min 取上清

3、重复离心5min

lysis buffer:urea np-40 ampholine 2-me pvp-40

六、

蛋白质样品制备(sigma)

秧苗蛋白质样品的提取按Davermal 等(1986)的方法进行。

100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入15 ml 10% 三

氯乙酸(丙酮配制,含10mM 即007%β-巯基乙醇),混匀,-20℃沉淀1 小时,4℃,15000 r/min离心15

min,弃上清,沉淀复溶于15ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇),再于-20℃沉淀1 小时,同上离心弃上清,

(有必要再用80%丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。

按每mg干粉加入20μl(可调) UKS液[95 M尿素,5mM 碳酸钾,125%SDS,05%DTT(二硫苏糖醇),

2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc,pH35-10),6% Triton X-100],37℃温育30min,期间搅

动几次,28度 (温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰)16000 r/min离心15 min,离心力越大时间长一点

越好!上清即可上样电泳。或者-70 度保存

七、

植物根中蛋白质的抽取(phenol)

(1) sample, 液氮研磨

(2) 装15 ml centrifuge 用tube

(3) 加 1M KH2PO4+K2HPO4 700 ul

(4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite

(5) 取上层液,蛋白质就在里面

八、

SDS extraction followed by acetone precipitation – simple extraction protocol that does not require phenol

Recommended start protocol for whole tissue extractions(hgp)

1 Grind 1 g of fresh tissue to a powder with liquid nitrogen in a mortar and pestle

2 Add 5 mL of extraction media (0175 M Tris-HCl, pH 88, 5% SDS, 15% glycerol, 03 M DTT) directly to

mortar and continue grinding for an additional 30 sec

3 Filter homogenate through two layers of miracloth into a 50 mL Falcon tube at room temperature

4 Immediately add 4 volumes of ice cold 100% acetone to filtered homogenate, mix by vortexing and place at -20

C for at least one hour to precipitate proteins

5 Centrifuge at 5000 g for 15 min to collect precipitated protein, decant supernatant

6 Gently blot residual acetone from container with Kimwipe and then wash pellet in 15-20 mL of cold 80%

acetone Be sure to thoroughly break-up pellet by pipetting, vortexing or sonication

7 Repeat steps 5 and 6

8 Collect final protein precipitate by centrifugation at 5000 g for 15 min and dry pellet by inverting on Kimwipe

for 15 min at 37 C

9 Resuspend final pellet in 05-1 mL of IEF extraction solution (8 M urea, 2 M thiourea, 2% CHAPS, 2% Triton

X-100, 50 mM DTT, 02% pH 3-10 ampholytes) by pipetting and vortexing at 25-30 C Incubate sample for 1 h at

room temperature with agitation Do not heat sample under any circumstances as this will lead to carbamylation of

proteins

10 Centrifuge for 10 min at 12000 g and use supernatant to rehydrate IPG strips

11 If protein quantitation is necessary, precipitate protein sample with TCA or acetone prior to performing

Bradford or Lowry assay as detergents and reducing agents interfere with these assays

Phenol extraction followed by methanolic ammonium acetate precipitation – an effective protocol for sample

preparation from protein-poor, recalcitrant tissues such as plants (see Hurkman and Tanaka, 1986, Plant

Physiology 81:802-80

九、

材料:细菌蛋白(puc18)

用甲醇提取的,冻干后用缓冲液溶解的。样品缓冲液是一般的。其中含又2%的SDS,20mmol 的2-巯基乙

醇。

十、

线粒体蛋白的提取 (bioon)

Isolation for Mitochondria

Modification by Bioon

Materials and reagents:

homogenizing buffer:

100 mM mannitol

10 mM Tris-HCl buffer (pH 75)

5 mM MgCl2

关 于 蛋 白 质

1 mM EGTA

1 mM DTT

leupeptin (01 ug/ml)

01M Na2CO3

Methods:

- 106 Cells were washed with ice-cold PBS and lysed by homogenizing in 1 ml buffer (ice-cold) containing 100

mM mannitol, 10 mM Tris, 5 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, leupeptin (01 ug/ml)

- Subjected to Polytron homogenization for three-four bursts of 3-10 s each at a setting of 65

- Intact cells and nuclei were separated by centrifugation at 120 g for 5 min at 4℃

- Supernatants were centrifuged at 10,000 g for 10 min to collect the heavy (mitochondrial) membrane pellet

- Cytoplasmic fractions were obtained by centrifuging supernatants at 100,000 g for 30 min

- Resuspended pellet to 025mg/ml in fresh preparation of 01M Na2CO3 (pH 115)

- Incubated on ice for 30 min

- Ultracentrifugation at 100000g for 1h at 4℃ to precipitate the mitochondria membrane protein And the

supernatants are mitochondrial matrix 05mg of proteins in mitochondria can get 100ug of proteins (the

alkali-resistant fractions)

Ref: PNAS, 2002,99:12825–12830

本方法只适用于提大鼠细胞线粒体蛋白,而不适用于线粒体功能检测

PDI是中电广通业信息技术有限公司的英文简称,这个公司是广电总局相关机构大力扶植的第三方广电信息运营商,其包括大陆所有卫星电视、收费电视、有线电视、直播星、境外卫星电视/广播等2000多套信源的数据库。

扩展资料:

其公司介绍如下:

1、其致力于建设全球广电媒资库与全国广电大数据仓库。

2、PDI将提供新闻监测、广告监测、版权监测以及其它基于市场需求而开发的数据和信息服务。

3、PDI的市场定位是中国首家广电大数据智能运营商。PDI率先实现了广电数据信息互联网化平台运营。

参考资料:

PDI (公司名称)-

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