hyp是什么意思

hyp

[英][hɪp][美][hɪp]

n

<废>忧郁，疑病;

v

使忧郁;

不足; 痛觉减退; 亥普;

双语例句

1

Expression of Hyp gene was also studied, hoping to find a new way to obtain large amounts of hypericin

同时，在已建立的再生体系的基础上，进行了Hyp基因（贯叶连翘中金丝桃素代谢途径关键酶的基因）表达的初步研究，以期为金丝桃素的大量获取增添一条新的途径。

1 outdoor ['əutdɔ:]

adj

1 (在)户外的，(在)露天的，(在)野外的

2 供户外使用的

3 喜欢户外活动的

4 在济贫院(或医院等机构)外发放的 [亦作 outdoors]

2 hypaethral [hai'pi:θrəl]

adj

1 露天的，户外的

2 (古建筑)中央无顶的，天井式的，院子式的

3 open air

n 露天，户外

adj 露天的；野外的

分类: 医疗/疾病 >> 药品

解析:

[药品名]附子

[英文名]Radix Aconiti Praeparata 本品为毛莨科乌头属植物乌头的子根。产于四川、陕西、云南、甘肃等地。

[别名]盐附子、黑顺片、黑附子、淡附子、川附子。

[成分]含多种生物碱：次乌头碱(Hypa-conitine)、乌头碱(Aconitine)、新乌头碱(Mesaconitine)、塔拉胺(Talatisamine)、川乌碱甲和川乌碱乙等。

[性味与归经]辛，大热，有毒。入心、脾、肾经。

[作用与用途]回阳，温里逐寒，止痛。经试验具有肾上腺皮质激素样作用，也能兴奋述走神经中枢。另外还具有强心、消炎、镇痛作用。

临床用于：

1．大汗亡阳、虚脱、四肢厥冷、心力衰竭：附于9g，干姜6g，炙甘草12g，水煎服，或用四逆注射液。

2 脘腹冷痛、呕吐泄泻、四肢腋冷：可用附子理中丸。

3．慢性肾炎、面色苍白、浮肿、尿少：附于、白术、茯苓、白芍、生姜各9g，水煎服。

4风寒湿痹、寒湿偏盛、周身骨节疼痛等：可与桂枝、白术等其他温经通络药配伍应用。

[用法与用量]3—15g，水煎服(宜久煎)。

[注意事项]不宜与半夏、栝楼、贝母、白鼓、白及同用。阴虚火旺患者及孕妇忌服。

[制剂]四逆注射液：每支2ml，相当于附子、干姜、甘草各0．4g。适用于心肌梗塞和心源性休克。每次2—4ml，静注或肌注。

“户外”英文说法：outdoors 

读法：英 [aʊt'dɔːz]  美 ['aʊt'dɔrz] 

释义：

1、adv 在户外

2、n 户外

3、adj 户外的

例句：

1、If you’re indoors, go outdoors Or head to the park

如果你是在室内，那去户外呆会儿，或去公园散散步。

2、Whatever the weather, he sticks out walking outdoors

无论天气好坏，他总坚持到户外散步。

扩展资料

outdoors的同近义词：alfresco 

读法：[æl'freskəʊ] 

释义：

1、adv 在户外，在露天

2、adj 户外的，露天的

短语：

1、Alfresco Lane 尖东美食里

2、alfresco o 在户外

3、Sharepoint Alfresco 企业内容管理系统

4、Play alfresco 外出游玩

5、alfresco bureau 局外体

https://panbaiducom/s/12DRJC4oGThWmwdq-ihr2lw

提取码：ypi7

https://panbaiducom/s/1lLhypauiZzuLyRFblRr0aw提取码：ape6

https://panbaiducom/s/1EK8OnN45fJmu4Rjl-aU74Q提取码：o3lx

https://panbaiducom/s/1T25DIuQa_4XuGEnfAzv55g提取码：3cox

主人公戴克斯特（Dexter）童年时候和他的哥哥被关在在迈阿密船坞里的装满发臭尸体集装箱里，在两英寸深的鲜血里泡了两天。其中一具被电锯杀手谋杀的尸体是他们的母亲，兄弟两人都目睹了母亲被残忍杀害。

一个叫哈里·摩根的警察，收养了年幼的戴克斯特，摩根把戴克斯特抚养成人，但戴克斯特不断的表现出对血的渴望。有一次他控制不住自己杀了一条狗。摩根知道以后，开始训练他，教会他怎么辨别好人与坏人，以及在作案之前如何控制现场不留线索。

他教导戴克斯特如何成为一个谨慎，细心和高效率的杀手，教导他如何掩盖证据，教导他如何生活在社会里才能减少被嫌疑的可能性，更主要的是他教导戴克斯特杀人的原则，正因为哈里教导的杀人原则，戴克斯特才只会去杀那些从前杀过人的人，去喋血般地维持心中的正义。

德克斯特白天是迈阿密警署凶杀组的血迹专家，与他的妹妹、警察黛布拉并肩作战缉拿罪犯

第一季第1集 戴克斯特

剧情

剧情

　　戴克斯特-摩根（Dexter Morgan），迈阿密警察局法医，过着双面人的生活。在日常生活里，他是警察局重案组的专家，帮助解决各种谋杀案。但在业余生活里，他四处追捕那些逃脱法律惩戒的罪犯，并且残酷地杀掉他们。他的妹妹戴波拉（Debra Morgan）也是警局警官。迈阿密发生了一系列连环杀人案，被害者都是妓女。戴波拉束手无策，来向哥哥寻求建议。不过，戴克斯特给与妹妹的可并不仅限于案情的帮助。在戴克斯特的帮助下，戴波拉和上司拉格塔的关系逐渐好转中。戴克斯特有一位女友，名叫丽塔（Rita）。丽塔单独带着两个孩子生活，她的前夫声名狼藉，正在服刑中。

第一季第2集 鳄鱼

　　戴克斯特锁定了下一个猎物：一名酒醉的司机，杀了一个十几岁的男孩。然而，突然发生的另一桩案情却让他不得不把自己的业余爱好推迟：一名警官同事遇害了。重案组侦探巴蒂斯塔和多克斯需要戴克斯特的帮助。戴克斯特和遇害的同事关系很好，非常乐于揪出凶手。而且，凶手扬言要对遇害警官的遗孀动手时，戴克斯特更是把这看作了对自己的挑战。戴波拉发现了确凿证据，帮助她调入了重案组。

第一季第3集 爆裂的Cherry

　　连环杀人案的凶手再次行凶，戴克斯特和戴波拉兄妹联手追凶。可是，戴克斯特在忙碌之余，心里仍然不忘发展业余爱好。然而，戴波拉非常怀疑拉格塔的判断，仍然私自拨出时间寻找她认为的真正凶手。戴克斯特的女友丽塔也遇到了麻烦。她前夫的老朋友找上门来，向她索要前夫曾经吞没的毒品。

第一季第4集 帮那孩子一下

　　连环杀人案愈演愈烈。遇害者的尸体残骸散布在迈阿密四周。戴克斯特因此想起了自己一段非常黑暗的童年。那段回忆是他过着双重生活的直接导火索。同时，拉格塔搜索托尼-图西的行动柳暗花明。新的证据表明图西和凶手之间有着不一般的联系。案件负责人多克斯警官不懈地追踪着凶手，但发现凶手其实在暗中监视着他的一举一动，心中开始有点害怕自己的人身安全。

第一季第5集 喜欢美国生活

　　戴波拉发现了首位在连环杀人案凶手下逃生的受害者，这大大帮助了拉格塔和她的重案组，他们得以真正确定凶手的身份。戴波拉和多克斯询问着受害者，希望他能够在嫌疑人名单中指出罪犯来。戴克斯特也在不懈地探索着这个案子。丽塔告诉戴克斯特，她的一个朋友未婚夫从古巴移民来美国，但在途中失踪了，后来发现人已经死亡，怀疑凶手是引渡他来美国的蛇头。戴克斯特决定为死者复仇。但是，随着他调查逐渐深入，他发现被害的不止一个人。

在公元前 333 年 11 月的伊苏斯战役中击败大流士三世后，亚历山大率领他的军队（约 35,000-40,000 人）进入腓尼基，在那里他接受了比布鲁斯和西顿的投降。泰瑞亚使节在亚历山大行军时会见了他，并宣布他们打算实现他的愿望。

围城的原因

亚历山大的要求很简单：他要在提尔祭祀赫拉克勒斯。（腓尼基神梅尔卡特大致相当于希腊的赫拉克勒斯。）泰尔人认为这是马其顿人占领这座城市的策略，并拒绝了，而是说欢迎亚历山大在建在大陆上的旧泰尔向赫拉克勒斯献祭 旧提尔没有战略意义——它不设防，提尔海军驻扎在新提尔的港口。

该泰尔拒绝投降亚历山大的愿望无异于宣告战争。但是，尽管年轻的亚历山大名声越来越大，但泰瑞安人有充分的理由充满信心。除了强大的海军和雇佣军外，他们的城市位于离岸大约半英里（08 公里）处，根据历史学家阿里安的记载，面向陆地一侧的城墙耸立在令人印象深刻的 150 英尺（46 米）高处。高度。他们是否真的站得那么高是值得怀疑和有争议的，但即便如此，提尔的防御也是强大的，并且在过去经受了多次强大的围攻。泰瑞亚人开始准备，将大部分妇女和儿童撤离到他们在迦太基的殖民地，留下大约 40,000 人。迦太基还承诺派遣更多的船只和士兵。

亚历山大意识到提尔的坚不可摧并召集了一个战争委员会，向他的将军们解释了在进攻埃及之前保护所有腓尼基城市的重要性。提尔是波斯舰队的据点，不能留下来威胁亚历山大的后方。为了阻止一场漫长而彻底的围攻，他向提尔派遣了使者，要求他们投降，但马其顿人被处决，他们的尸体被扔进了海中。

攻城战开局

谈判失败，亚历山大于公元前 332 年 1 月开始行动。占领旧提尔后，他开始使用从旧城建筑物中取出的岩石、木材和瓦砾，建造一条穿过海峡通往提尔城墙的堤道（或鼹鼠）。最初，工作进展顺利：大陆附近的水很浅，底部泥泞，但随着堤道加长，马其顿人和希腊人开始遇到麻烦。海底在城市附近急剧搁置，深度为 18 英尺（55 米）。工作慢得像蜗牛一样，工作团伙发现自己越来越受到来自城墙的导弹射击的骚扰。

亚历山大用生皮覆盖的木材建造了两座攻城塔，并将它们放置在他建造的堤道的尽头。

亚历山大用生皮覆盖的木材建造了两座攻城塔，并将它们放置在堤道的尽头。这些塔楼顶部的火炮引擎能够对墙壁进行还击，工作团伙还竖起了木栅栏作为额外的保护措施。工作继续进行，亚历山大将大部分时间都花在了痣上，向汗流浃背的工人分发小礼物，并以身作则。

泰瑞安人随后开始了他们的第一次重大围城防御行动。他们把一艘旧的运马船装满了可燃材料：谷壳、火把、沥青和硫磺。他们从桅杆上吊下双尺臂，然后将这些钩状的大锅吊在装满挥发性易燃油的大锅上。船尾被压载以将船头抬离水面，两艘厨房将她拖到鼹鼠的尽头，将她和他们自己搁浅。

船员们点燃了火船上的材料，所有人都设法游到了安全的地方。当船燃烧时，鼹鼠的尖端变成了地狱，点燃了两座塔。一群乘坐小船的泰瑞亚人从城市中划出，降落在堤道的不同地点，与疯狂地试图扑灭火焰的围攻者交战。攻城器械被烧毁，鼹鼠边缘的栅栏被毁。

亚历山大召集他的舰队

对泰瑞亚人来说，这次袭击取得了巨大的成功，但他们没有考虑到亚历山大的决心，他现在下令拓宽堤道并建造更多的塔楼。意识到海军优势是夺取提尔的关键，他暂时离开了围城，前往西顿取回自己的船只。此外，他还从Byblus，Aradus，接受血管罗德，利西亚，基利家和马其顿。（wwWLishixinzhiCom）塞浦路斯国王又向西顿派遣了 120 艘船。亚历山大现在总共拥有大约 220 艘船。

在等待各种海军特遣队到来的同时，他在内陆待了 10 天，在 领土上进行了一些小型行动。回到西顿后，他很高兴地注意到克莱德的到来，他派他到希腊招募士兵，他有 4,000 名雇佣兵。

亚历山大没有浪费更多的时间，启航前往提尔。他的旗舰在舰队的右侧，当提尔在清晰的视野范围内时，舰队停了下来并保持了原位，让他们的外观的全部影响在城墙上的观察者身上显现出来。泰瑞安人大吃一惊：直到那一刻他们才知道亚历山大的舰队规模已经扩大了。现在他们的人数已经远远超过了，迦太基承诺的帮助也没有实现。

在这种情况下，海军交战是不可能的，泰瑞亚人所能做的就是封锁他们两个港口的入口。他们在南部或埃及海港的入口处漂浮了一个栅栏，并在北部（西顿）港口的入口处停泊了 Triremes。

亚历山大通过对西顿港的袭击来测试这些反制措施的力量，其中 3 艘泰瑞亚帆船迎面撞沉并沉没，但他并没有发动全面的海上进攻。相反，他命令他的塞浦路斯分遣队封锁北部港口，腓尼基船只在岛的南端守夜。攻城机安装在鼹鼠和锚定的船上，并开始对防御进行持续轰炸。

亚历山大无法让他的船只靠近城市本身，因为泰瑞安人将巨大的岩石扔进城墙下的海里。围攻现在进入了可能是最艰苦和最危险的阶段。

亚历山大的船只用套索套住了一些巨石，并将它们拖离城墙。作为回应，泰瑞亚人给他们的一些厨房披上了装甲板，并出动切断了围攻舰船的锚索。亚历山大为他自己的一些船只装备了装甲，并将它们用作他的攻城舰前面的屏障，但泰瑞亚潜水员继续切断锚定船只的电缆。亚历山大最终通过用链条代替绳索来解决问题。更多的巨石从堤道上用套索套住，并用起重机吊起。

在所有这些行动中，双方进行了一场漫长而痛苦的炮兵决斗，泰瑞亚人将大锅烧红的沙子从墙壁上倾倒到围攻的船只上。在风的带动下，它点燃了船只，穿透了衣服和盔甲，使人们陷入烧焦、起泡的痛苦之中。这种方法虽然有效，但很难使守城者受到围攻者的喜爱。

泰瑞亚人意识到他们迫在眉睫的危险，在北部港口的入口处展开帆，并因此隐蔽地准备出击。十三艘桨帆船配备了防御者可以召集的最优秀的桨手和海军陆战队员，在炎热的地中海午后，他们排成一行默默地划出港口。大多数封锁西顿港的塞浦路斯船只都人手不足，泰尔人取得了彻底的惊喜，在咆哮的战吼声中进行了猛烈的进攻。两艘塞浦路斯船被击沉，还有更多的船只分散。

亚历山大登上了一艘船，亲自率领了5艘Triremes和任何Quinquiremes准备战斗的反击。在环岛航行时，他遇到了泰瑞亚舰队，后者立即解除了他们的婚约，逃往北部港口。在随后的混乱行动中，有数量不详的泰瑞亚舰艇受损，两艘厨房在港口入口处被俘。大多数泰瑞安人都设法游到岸上，以保证城市的安全。

最后的突击

亚历山大现在将他的船只直接带到城墙下，并开始用攻城槌敲打它们。位于该岛北端的希腊军队试图突破，但失败了。南部防御工事发生了一个小缺口，但马其顿人跨堤进攻只造成人员伤亡和失败。

亚历山大等了三天才继续进攻。虽然转移攻击引起了防御者的注意，但两艘带有桥接设备的船只接近了南部的突破口。亚历山大本人指挥这支部队，该部队主要由精英 hypaspists 和 pezhaitoroi 组成。马其顿人设法强行爬上城墙：希帕斯派的指挥官阿德墨图斯是第一个登上城垛的人，在他劝告他的人继续前进时被长矛杀死。尽管如此，这次袭击还是取得了成功，很快马其顿人就涌入这座城市，杀戮和抢劫。在最初的突破被迫进行之后，随着越来越多的希腊人和马其顿人从包括港口在内的各个地点成功进入这座城市，亚历山大的指挥权越来越大。

幸存的泰瑞安人退回了位于城市北部地区的古老堡垒阿格诺瑞姆，但在他们被屠杀之前只坚持了一小段时间。围城者血流成河，经过漫长而苦涩的围城，他们已经没有心慈手软了。几个月来，他们忍受着艰苦的劳动，饱受大炮和射箭的折磨，亲眼目睹了被俘战友在城墙上的屠杀。这座城市被占领时，有 6000 名泰瑞亚人被屠杀，另有 2000 人被钉在海滩上。另有 30,000 人被卖为奴隶。幸免于难的包括国王和他的家人，以及一些在梅尔卡特神庙避难的迦太基朝圣者。马其顿人的损失达 400 人。

随着围攻终于结束（从一月开始，七月结束），亚历山大向赫拉克勒斯献祭，并在城市的街道上举行了火炬比赛和凯旋 。随着提尔被征服，亚历山大可以将注意力转向征服加沙和埃及。

全集网盘资源：

https://panbaiducom/s/1H2pisJ6znNnA0GRl9VWTnQ提取码：mrnp

https://panbaiducom/s/1uNYss67OzppsoqA-c8TwyQ

提取码：cbm9

https://panbaiducom/s/1H2pisJ6znNnA0GRl9VWTnQ提取码：mrnp

https://panbaiducom/s/1o-JYrVtjfKUOIKpaHwbJDA提取码：ta7r

截至2021年7月，该剧共7季，已全部更新完结。

《真爱如血》（True Blood）是一部根据查琳·哈里斯（Charlaine Harris）的两部系列小说《南方吸血鬼之深夜复活》、《南方吸血鬼之死亡俱乐部》改编的美国电视剧。由安娜·帕奎因，史蒂芬·莫耶，亚历山大·斯卡斯加德，山姆·特拉梅尔，黛博拉·安沃尔等主演；共有7季80集，2008年9月7日由HBO播出。

剧情：

故事发生在路易斯安那州的一个小镇——Bon Temp。由于日本人发明的一种叫做“真血”的人造合成血，吸血鬼们可以通过购买的方式获得血液来维生，一夜之间从传说中的怪物摇身变成了普通市民。虽然人类不再是吸血鬼的盘中餐，理论上两者能够和平共处共同生活，但是对于这些“走出棺材”的生物的理解仍有待加强。宗教领袖和政府官员选择了他们的立场，但是在Bon Temp小镇，审判还未开始。Sookie Stackhouse是个会读心术的酒吧女招待，深知被社会驱逐的感觉。由于吸血鬼没有可以让她窥视的脑电波，她乐意与他们打交道，尤其是173岁英俊的 Bill Compton。可是当Sookie卷入跟随Bill到来的一系列神秘事件的时候，容忍将被迫受到检验。

[](javascript:void(0);)

|

CRISPR/Cas系统是细菌和古菌特有的一种天然防御系统，用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。当外源基因入侵时，该防御系统的 CRISPR 序列会表达与入侵基因组序列相识别的 RNA，然后 CRISPR 相关酶(Cas)在序列识别处切割外源基因组DNA，从而达到防御目的。

根据Cas蛋白的特点，可将CRISPR/Cas系统分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型和Ⅲ型系统需要借助复杂的蛋白复合体发挥作用，Ⅱ型系统仅借助 Cas9蛋白和sgRNA即可对靶目标进行编辑，结构简单，操作容易，因此目前主要使用Ⅱ型CRISPR/Cas9 系统。

CRISPR/Cas自诞生以来，迅速发展，已经成为生命科学领域最耀眼、最有前景的技术。尤其是近两年，在全世界科学家的共同努力下，CRISPR/Cas相关新进展新突破不断涌现。

一、基因编辑技术的发展史

基因编辑可以分为三代，第一代：ZFN；第二代：TELEN；第三代：CRISPR/Cas。这三个基因编辑技术都利用了DNA修复机制，所以我们先来了解一下DNA修复机制（ 图1 ）。[上传失败(image-8dab49-1625385468208)]

图1-NHEJ修复（左），HDR修复（右）

NHEJ（Non-homologous end joining）

非同源性末端接合

NHEJ修复机制不需要任何模版，修复蛋白直接将双股裂断的DNA末端彼此拉近，在DNA连接酶的帮助下重新接合（ 图1 ）。

HDR（Homology directed repair）

同源重组修复

当细胞核内存在与损伤DNA同源的DNA片段时，HDR才能发生。

NHEJ的机制简单又不依靠模版，因而NHEJ的活性相对于HDR高出许多。但NHEJ修复出错的概率较高，容易造成移码突变等，基因编辑正是利用了这一点（ 图1 ）。

1ZFN的识别切割机制

融合锌指模块和FokI切割结构域形成ZFN ；以二聚体的形式靶向切割每个锌指结构；特异识别3个碱基 ；组装多个锌指结构(识别12-18bp)形成的ZFN对可特异切割基因组靶点 （ 图2 ）。

[上传失败(image-3f1d8d-1625385468209)]

图2-ZFN基因编辑原理图

2TALEN的识别切割机制

两个TALE靶向识别靶点两侧的序列；每个TALE融合一个FokI内切酶结构域；FokI通过TALE靶向形成二聚体切割靶点；设计灵活识别特异性强（ 图3 ）。

[上传失败(image-6dcfc-1625385468209)]

图3-TELEN基因编辑原理图

3CRISPR/Cas9的识别切割机制

crRNA通过碱基配对与 tracrRNA结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA（ 图4 ）。

[上传失败(image-c85235-1625385468209)]

图4-CRISPR/Cas9基因编辑原理图

ZFN、TELEN、CRISPR/Cas9比较

[上传失败(image-dd6344-1625385468209)]

图5-三种基因编辑的比较

二、CRISPR/Cas技术的介绍

CRISPR/Cas9 系统的发现

1987年，在大肠杆菌的基因组中首次发现了一个特殊的重复间隔序列——CRISPR序列，随后，在其他细菌和古菌中也发现了这一特殊序列。

2005年，发现这些CRISPR序列和噬菌体的基因序列匹配度很高，说明CRISPR 可能参与了微生物的免疫防御。

2011年，CRISPR/Cas系统的分子机制被揭示：当病毒首次入侵时，细菌会将外源基因的一段序列整合到自身的CRISPR的间隔区；病毒二次入侵时，CRISPR 转录生成 前体crRNA (pre-crRNA)， pre-crRNA 经过加工形成含有与外源基因匹配序列的crRNA，该crRNA与病毒基因组的同源序列识别后，介导 Cas 蛋白结合并切割，从而保护自身免受入侵。

2013年，发现CRISPR/Cas9系统可高效地编辑基因组。随后张锋等使用CRISPR系统成功的在人类细胞和小鼠细胞中实现了基因编辑。

从此开始，CRISPR/Cas9技术给生命科学领域带来了巨大冲击，CRISPR/Cas9相关研究成果频频登上CNS等顶级期刊，近两年更是成为诺贝尔奖热门候选。

CRISPR/Cas技术的原理

CRISPR/Cas9系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA（trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计 crRNA 和 tracrRNA 这两种 RNA，改造成具有引导作用的sgRNA （single guide RNA ），从而引导 Cas9 对 DNA 的定点切割（图4）。

CRISPR/Cas技术的优势

设计简单，简明的碱基互补设计原则，识别不受基因组甲基化影响，能靶向几乎任意细胞任意序列，方便同时靶向多个靶点，切割效率高。

三、CRISPR/Cas的脱靶效应

PAM (Protospacer adjacent motif )

前间区序列邻近基序

PAM序列区是CRISPR/Cas9系统行使切割功能的基本条件。如果靶序列 3′端没有PAM序列，即使靶序列与sgRNA序列完全匹配，Cas9蛋白也不会切割该序列位点。 PAM序列主要影响CRISPR/Cas9的DNA切割效率。在细胞水平上，NGG介导的切割效率是最高的。

sgRNA (Single guide RNA )

向导 RNA

sgRNA与目标基因组相结合的 20nt 序列区决定着 CRISPR/Cas 系统的靶向特异性。CRISPR/Cas9与靶位点识别的特异性其实主要依赖于sgRNA与靠近PAM区的10~12 bp的碱基配对，而其余远离PAM序列 8~10 bp 碱基的错配对靶位点识别的影响并不明显。目前研究结果均提示，可能靠近 PAM 的 8~14 bp 序列是决定特异性的关键，其他序列也均在不同程度上影响脱靶效应。

CRISPR/Cas9的脱靶效应给研究带来了一定程度上的不确定性，也是限制其发挥更大潜力的主要原因之一。

2017年5月30日， Nature 杂志子刊 Nature Methods 刊登了美国哥伦比亚大学研究人员的一篇文章，研究人员通过CRISPR/Cas9成功修复了导致小鼠失明的基因后，对小鼠进行全基因测序，发现修复后的小鼠基因组有超过1500个单核苷酸突变，以及超过100个位点发生大片段插入或缺失（ 图6 ）。文章的结论无疑引发了巨大震动，也给正在进行中的CRISPR/Cas9带来了不确定性。

[上传失败(image-f21b76-1625385468208)]

图6--动物体内实验中CRISPR/Cas9编辑后发生意想不到的突变

仔细分析后，发现该文章并不十分严谨，文章仅有两只小鼠作为实验组，一只作为对照组，数量不足以证明结论是否只是个例。而且单碱基突变是生物体内自然现象，不能全归于CRISPR/Cas9。整个实验只基于一个sgRNA数据，且该sgRNA特异性评分很低，造成脱靶效应也应该在预料之中（ 图7 ）。

[上传失败(image-751d94-1625385468208)]

图7--针对 Nature Methods 文章的回应

经过一系列的研究和改进，目前CRISPR系统的脱靶性已经很低，当然，要想达到理想的状态，还有很长的路要走。

四、CRISPR/Cas技术的进展

2016年6月，张锋在 Science 发表文章，发现CRISPR/Cas13a能有切割细菌的特定RNA序列。

2016年9月，Jennifer Doudna在 Nature 发表文章，证实CRISPR/Cas13a可以用于RNA检测。

2017年2月22日，美国纪念斯隆凯特林癌症中心（MSK）研究人员在 Nature 杂志发文，使用腺相关病毒（AAV）介导，将CRISPR/Cas9基因编辑技术应用于CAR-T疗法。该研究既解决了传统CAR-T疗法的随机整合可能存在的潜在危害，又大大降低了CAR-T细胞发生分化或癌化的风险，赋予了CAR-T技术全新的高效性、稳定性、安全性。

2017年8月2日，Shoukhrat Mitalipov在 Nature 发表长文，使用CRISPR/Cas9技术修正了植入子宫前的人类胚胎中一种和遗传性心脏病有关的变异。该研究证实了通过编辑人类胚胎进行治疗遗传病是安全可行的。值得一提的是，该成果受到了基因编辑领域大牛George Church等人的质疑。

2017年8月11日，杨璐菡等在 Science 发表文章，通过CRISPR/Cas9技术敲除猪基因组中的内源逆转录病毒（PERV）序列，并克隆出多只PERV失活小猪。向最终实现使用猪器官进行人体器官移植的终极目标迈进了一大步。

2017年9月，杂交水稻之父”袁隆平院士宣布使用CRISPR/Cas9技术敲除与镉吸收和积累相关基因的水稻育种成功。该研究从根本上解决了水稻镉污染的问题，将扭转我国部分农作物重金属超标的问题，进而改善部分人群重金属慢性中毒的问题。

2017年10月4日，张锋在 Nature 发表论文证实CRISPR/Cas13a能够在哺乳动物细胞中编辑特定的RNA。CRISPR/Cas13a能够达到RNAi相似的降低基因表达的效率，而且有更强的特异性，且对细胞内天然的转录后调控网络的影响更小。

2017年10月19日，Jennifer Doudna在 Nature 发表文章，设计了高精确性的Cas9变体—HypaCas9。该研究极大地降低了Cas9的脱靶效应，且不降低靶向切割效率。

2017年10月25日，张锋在 Science 发表文章介绍CRISPR新系统--REPAIR，可以高效的进行RNA的单碱基修复。因为不改变DNA序列，所以为通过基因编辑治疗遗传病而又不永久影响基因组提供了新可能。

2017年10月25日，哈佛大学Broad研究所的David Liu实验室在 Nature 发表长文，报道了新型腺嘌呤基因编辑器——ecTadA-dCas9，可以将A·T碱基对转换成G·C碱基对，该技术首次实现了不依赖DNA断裂即可进行基因编辑的技术，即单碱基基因编辑技术。该技术高于其它基因组编辑方法的效率，且几乎没有随机插入、删除或其它突变等不良副作用，因此为今后大范围治疗点突变遗传疾病提供了极大的便利。

五、展望

近几年CRISPR/Cas基因编辑技术飞速发展，推广应用到了生物、医学、农业以及环境等多个领域，造就了一批批科研奇迹，尤其是在遗传病的治疗、疾病相关基因的筛查与检测、肿瘤治疗以及动植物的改造、病原微生物防治等领域有着巨大的潜力，也将深远地影响整个世界。

特别感谢：BioArt主编给予的帮助和意见以及吉满生物吴晨提供图1-图5的。

|

| |