分子进化笔记（四）: MEGA5构建系统发育树

1．准备序列文件

准备fasta格式序列文件（fasta格式：大于号>后紧跟序列名，换行后是序列。举例如下）。每条序列可以单独为一个文件，也可以把所有序列放在同一文件内。

核酸序列：

>sequence1_name

CCTGGCTCAGGATGAACGCT

氨基酸序列：

>sequence2_name

MQSPINSFKKALAEGRTQIGF

2．多序列比对

打开MEGA5，点击Align，选择Edit/BuildAlignment，选择Createa new alignment，点击OK。

要选择序列类型，核酸（DNA）或氨基酸（Protein）。

选择之后，在弹出的窗口中直接Ctrl + V粘贴序列（如果所有序列在同一个文件中，即可全选序列，复制）。也可以：点击Edit，选择Insert Sequence From File，选择序列文件（可多选）。

序列文件加载之后，呈蓝色背景（为选中状态）。点击按钮

选择Align DNA（如果是氨基酸序列，则会出现Align Protein）。弹出的窗口中设置比对参数，一般都是采用默认参数即可。点击OK，开始多序列比对。

比对完成后，呈现以下状态。

这时需要截齐两端含有---的序列：选中含有---的序列，按键Delete删除（注意：两端都需要截齐）。截齐之后，保存文件为：filenamemas

3． 构建系统进化树

多序列比对窗口，点击Data，选择Phylogenetic Analysis，弹出窗口询问：所用序列是否编码蛋白质，根据实际情况选择Yes或No。此时，多序列比对文件就激活了，可以返回MEGA 5主界面建树了。

MEGA 5主界面。点击Phylogeny，选择Construct/Test Neighbor-Joining Tree…弹出的对话框询问：是否使用当前激活的数据，选择Yes。这时弹出建树参数设置对话框，更改No of Bootstrap Replications为1000，其他参数默认即可，点击Compute。

这里解释一下，Construct/Test Maximum Likelihood Tree…（ML）或Construct/Test Neighbor-Joining Tree…（NJ）或Construct/Test Minimum-Evolution Tree…（ME）为三种不同的建树方法，NJ方法最常用。

建树完成，效果如下所示。注意，要点击Bootstrap consensus tree查看树形。保存文件为filenamemts(可以用MEGA 5打开)。

4． 后期修改

为了美观，也是为了满足发表文章的要求，需要对进化树进行树形、字体、字号的修改。点击View，选择Options。弹出窗口中，在Tree标签中可以修改枝与枝之间的距离（Taxon Separation）、枝长（BranchLength）和树宽（Tree Width），调整至美观即可。Branch标签中，可以选择勾选“Hide values lower than %”，一般隐藏50%以下的数值。其他的参数可以自行研究，一般默认即可。

文字字体、字号的修改。

方法1：点击Image，选择Saveas PDF file，保存至filenamepdf。打开软件AdobeIllustrator CS6，文件---打开---选择刚刚保存的PDF文件。修改好之后，文件---导出---可以导出很多种类型的文件。一般选择保存成TIFF（tif）文件，颜色模式选择RGB，勾选LZW压缩，其他默认。

方法2：点击Image，选择Copyto Clipboard。粘贴到Word中，右击进化树，编辑。即可更改字体字号。修改好可以了。或者进一步导出格式：先将该word文件打印生成PDF文件，再用Adobe Illustrator CS6或Adobe Photoshop CS6导出格式。

有些女生的睫毛不是很好看，需要用到睫毛膏，比较倾向买美宝莲牌子，它家的睫毛膏款式很多。那么美宝莲睫毛膏有哪些种类下面我为你提供美宝莲10支睫毛膏测评。

美宝莲10支睫毛膏

1，LASH SENSATIONAL MASCARA

这款睫毛膏我觉得没有评分27那么的不好用，刚打开的时候真的不太好用，膏体比较湿润，刷不出什么效果。打开之后，膏体没那么湿润了，效果会好很多。能把卷翘度hold比较好

纤长度：35/5

浓密度：35/5

晕染度：有一些

2，LASH SENSATIONAL® LUSCIOUS MASCARA

这款睫毛膏我用完了，我决定比上面那款好用一些，膏体没有那么的湿润。浓密卷翘的效果会好一点，刷头的形状也是比较好的可以照顾到眼头。比较推荐睫毛本身条件比较好的妹子使用。我回购过1只。

纤长度：25/5

浓密度：4/5

晕染度：有一点

3，THE COLOSSAL BIG SHOT™ MASCARA

这款是最近新出睫毛膏，刷头比较大，各方面照顾的比较好，纤长浓密效果都有照顾到。官方介绍是，可以突出你的睫毛，并可隐形眼镜也可以使用。应该是想表达调到眼镜里面也不会不舒服。我觉得他对卷翘可以hold特别好，和kissme有的一拼。而且刷出来的睫毛比较自然，细软，很自然的感觉。

纤长度：4/5

浓密度：4/5

晕染度：几乎不晕染

4，VOLUM' EXPRESS® THE MEGA PLUSH MASCARA

这款的买点应该是这个刷头是弹性的，可以动的。刷毛比较长，但是比较柔软，使用感比较好，但是我不是很喜欢，因为效果比较一般，而且这个刷头太大了，根本不能刷下睫毛。

纤长度：2/5

浓密度：2/5

晕染度：有一点晕染，我盆友的反映是，晕成狗

5，VOLUM' EXPRESS® THE FALSIES® BIG EYES® MASCARA

两个刷头，可以把上下睫毛都照顾到，睫毛的丰盈效果比较好。但是这款致命的弱点就是，不卷翘。不仅不卷翘，而且会让睫毛耷拉下来。不知道膏干一点点之后会不会好一点点

纤长度：3/5

浓密度：3/5

晕染度：一丢丢

6，THE FALSIES PUSH UP ANGEL™ MASCARA

这个刷头比较好，可以把睫毛的卷翘度推起来，而且很适合刷下睫毛，可以很好的控制睫毛的方向。但是，这个刷头容易把睫毛刷的并在一起。每次沾取的膏体不会很多，反复刷几次，浓密度也是不错的。

纤长度：4/5

浓密度：4/5

晕染度：几乎不

7，THE FALSIES® PUSH UP DRAMA™ MASCARA

和上面那款是一个系列的，这款比较注重浓密和卷翘。我个觉得满一般的，没有很惊艳。但是不会苍蝇脚啊什么的。我觉得这两款叠加使用的起来的效果是最好的。

纤长度：3/5

浓密度：45/5

晕染度：几乎不

8，LASH STILETTO® ULTIMATE LENGTH MASCARA

我很喜欢美宝莲的方官的睫毛膏!这个浓密卷翘效果是比较好的, 可以把睫毛刷的很开，而且睫毛膏里面添加了维生素b-5。刷头也不是很大，正好刷的那种，但是刷毛会有点硬，刷的时候要小心，碰到内眼睑会有点不舒服的。这和我回购过2根了

纤长度：35/5

浓密度：5/5

晕染度：几乎不

9，Illegal Length Fiber Extensions Mascara

和上面那款一个系列，但是主张的是纤长的效果，这款的纤长效果确实比上面那恶好一些。我没有看到这款里面有纤维，就是感觉睫毛有刷长了一些。

纤长度：45/5

浓密度：4/5

晕染度：几乎不

10，高跟鞋睫毛膏

这款我第一次使用是在国内专柜上买的，后来我去买好像说是下架了。这款我真的超级超级超级超级喜欢!据说就是日版的。纤长效果超级好，里面是有纤维的那种，睫毛可以刷的很长很长!但是刚开始的时候膏体会比较湿润，卷翘度会比较一般，但是过一段时间卷翘度也会比较好的。我不是很清楚这款是否防水，但是不是很卸妆，卸除的时候是颗粒状的。

纤长度：5+/5

浓密度：35/5

晕染度：几乎不

总结

美宝莲的睫毛膏和欧美系其他睫毛膏有个共同的缺点就是刷头太大了，适合欧美那种很长的睫毛，很大的眼镜。亚洲人刷起来有点吃力，需要小心一点。美宝莲的睫毛膏基本都不是晕染的很厉害，时间久了就是下面皮上会晕染一点点，在可以接受的范围内的。有时候感觉温水可卸的睫毛膏的抗油能力会更好一点。这几只里面我最喜欢的是10高跟鞋