高效液相色谱纯化蛋白质一般都用什么柱子

色谱柱在HPLC中是非常关键的部件一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了色谱柱是消耗品,有一定寿命,使用中也非常容易出问题普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年使用不得当用两、三个月就可能损坏所以使用中应该非常注意

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在使用一根新的色谱柱之前,一定要看柱说明书,将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚接触最多的是C18色谱柱,它对试剂应用的范围非常广,甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求,有的色谱柱只能使用水,不能使用有机试剂,有的色谱柱只能使用有机试剂,而且使用指定是某一种,象GPC色谱柱这些事情一定搞清楚,如果流动相使用不对,柱子很快会损坏另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子

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柱子是有方向的,柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向当换新柱子时,不要马上就接到检测器上使用将柱子入口处接在进样器的出口,柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器,按箭头方向垂直朝上,用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上,否则小气泡跑到检测池里,就很难赶走,检测器产生噪声信号,基线也就走不好

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关于压力对色谱柱的影响：常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间,生产厂家不同,耐压也不同,从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高,但柱效高低不仅与耐压的高低有关,还有其他因素从使用中看,在保证柱效的同时,耐压不要太高,仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力,检查柱压力应分段检查压力过高不仅柱子受不了,其他的部件也会出问题,例如自动进样器

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色谱柱对pH值是有一定的使用范围以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH

耐碱性能不太好,流动相的pH大于8会使硅胶溶解有些分析条件须用碱性流动相,这时一定要选耐碱性好的色谱柱,流动相的PH值过高或过低,流动相使用纯水,使用高浓度磷酸盐缓冲溶液,使用离子对试剂等,均可能造成色谱柱填料被化学破坏,这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的

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色谱柱的使用温度不要超过说明书上规定的温度一般使用温度在60℃以下,典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间,高温使用会缩短柱寿命

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色谱柱使用过程中压力的骤然波动,温度的骤然变化或机械撞击都会对色谱柱床产生影响进样过程中,进样阀转动太慢引起压力波动；流速的突然增大都应在日常分析中尽量避免一般说来,在低柱压下操作可大大减少由压力波动造成的柱效损失这种问题是不可修复的

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色谱柱内存在缓冲盐时,如果用高浓度甲醇或其他有机溶剂冲洗色谱柱,会导致柱内缓冲盐结晶析出,造成柱压明显升高出现该问题时,反相色谱柱首先应使用20%左右有机溶剂的水溶液低流速冲洗色谱柱,使柱内的盐全部溶解冲出,再换成高浓度甲醇或其他有机溶剂的流动相

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样品的预处理,许多样品,特别是生物样品与中药材,其组分复杂,样品预处理是影响色谱柱寿命的关键样品经过常规的前处理后,进样前还需进行以下步骤：a用微孔过滤膜出除去样品中的不溶颗粒,以免赌塞柱头筛板及柱内填充床,使柱压升高b将样品用流动相溶解或用与流动相互溶的溶剂溶解

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为了保护色谱柱,在色谱柱前接了一个保护柱保护柱通常是比较短的分析柱,通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质,达到保护色谱柱的目的保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱结果的改变,最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱

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色谱柱用合适的溶剂保存,若为C18柱推荐用甲醇保存在日常分析中,流动相含有的不纯物质和样品中的某些组分会吸附在色谱柱中,随着分析时间的延长,吸附量会越多,所以柱子要经常清洗,一般柱子使用一两个星期洗一次,柱子不同清洗的流动相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗这对柱子不好,一般清洗3～4小时,另外色谱柱长时间不用,存放时要将柱子洗干净,脏柱子放置时间越长,柱效会大大降低存放时,柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈）,两端封死

近几年化验室用的液相色谱仪是越来越多,所用色谱柱的种类也越来越多,问题出的也较多,值得注意的是,不论怎样对色谱柱进行处理,一般都很难恢复到原有水平,因此,大家再使用色谱柱之前一定要看说明书,把以上几项问题搞清楚后再使用,尽量避免发生如上问题

会发生堵塞。蛋白液没有离心除去沉淀，上柱时一般是会堵的。蛋白液上柱前还是需要高速离心（至少20000G），或者045的滤膜过滤来达到澄清，之后再上柱

因为柱子的柱头处都是由滤膜的，如果是比较大的沉淀一般滤膜很快就会被杜塞，接着就造成样品进不去柱子里面。但是压力却还存在，过大的压力会造成填料碎裂。即使是小颗粒的沉淀或者浑浊样品，进入到柱子里面，这些沉淀极有可能会吸附在填料颗粒上，而且是很难被洗脱下来的。之后的结果就是填料颗粒被沉淀包裹，柱效下降。所以，任何一家厂家的柱子说明书里都会有，上样前需要保持样品澄清。

你说的 应该是气相色谱吧。如果两台气相色谱差的很大的话，最主要的还是要先看你所用的条件是不是一致。如果所有条件都相同的话，而两台仪器也是同一型号或者性能也较为接近的话那基本主是柱子问题了。换的话当然换成与另一台仪器相同的柱子了，这样才能有比较性嘛。新换的柱子不一定要老化，但换的新的柱子是要老化的。新柱子老化后会使它固定相分布更好，也会演延长柱子的使用寿命。老化一般要看柱子的使用说明，不能超过最高奈受温度，最好比最高承受温度低20-30度（比最高使用温度高20-30度），可以用程升的办法。比如以5度每分钟的速度升到第化温度，再降下来，再升，这产两三次，老化就好了。注意的是，不用连接检测器，其它条件都不用变。流速什么的和你做样品 时一致就好了，千万小注意的是老化时一定要有载气通过柱子啊。如果你平时都在做样品，并且没出现其它问题的话，不用试漏。