液相C18的柱子正常压力是多少

正常压力不是固定的，一般来说，流速10ml/min条件下，纯乙腈的话压力很低，正常压力为2-3MPa。

液相C18平面色谱法与柱色谱法相比，大差别在于柱色谱法固定相填于柱管中，而平面色谱法是将固定相涂布于平面的载板上（薄层色谱）或以纸纤维作为载体（纸色谱），流动相通过毛细管作用流经固定相，被分离物质在两相上因分配系数不等而分离。

经典液相色谱法是现代液相色谱法的基础，二者的主要区别在于仪器装置不同，前者手工操作，不需要昂贵的仪器设备，而后者仪器化。其次是使用的固定相不同，前者采用一般固定相，后者采用高效固定相。

扩展资料：

经典液相色谱的流动固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分离后的样品是被分级收集后再进行分析的，使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢，而且操作也比较复杂。

粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高压输液泵和自动记录的检测器，克服了经典液相色谱的缺点，发展成高效液相色谱。

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光学类检测器

1、紫外吸收检测器（UVD）是目前HPLC中应用最广泛的检测器。它的主要特点是灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。它要求被检测样品组分有紫外吸收，属于选择性检测器。

2、二极管阵列检测器（PDAD）是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器，它可以看作是UVD的一个分支。在对每个洗脱组分进行光谱扫描，经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱。其中吸收光谱用于定性（确证是否是单一纯物质），色谱用于定量，常用于复杂样品（如生物样品、中草药）的定性定量分析。

3、荧光检测器（FLD）同样属于选择性检测器，其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的，应用也较多，仅次于UVD。它适用于能激发荧光的化合物。很多与生命科学有关的物质，如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用，尤其在用荧光衍生后，可以检测很微量的氨基酸和肽。

通用型检测器

1、示差折光检测器（RID）是一种通用型检测器，只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。生命科学中常遇到各类糖类化合物，没有紫外吸收，一般常用示差折光检测器。它的通用性比UVD广，但灵敏度要低，对温度变化敏感，并与梯度洗脱不相容，因而限制了它的使用。

2、蒸发光散射检测器（ELSD）也是一种通用型的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，而不需要样品含有发色基团。ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。ELSD灵敏度比RID高，对温度变化不敏感，基线稳定，可用于梯度洗脱。现在ELSD已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。

3、质谱检测器（MSD）是另一种通用型检测器，在灵敏度、选择性、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点。但它的昂贵操作费用和复杂性限制了它的推广应用。

理论塔板数中国药典规定：一般要求分离度达到15以上。理论板数是评价色谱系统的分离能力参数，达到2000以上是基本要求。

理论塔板数处理方法反相柱分别用甲醇:水=90:10,纯甲醇（HPLC级）,异丙醇（HPLC级）,二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相,依次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积然后再以相反的次序冲洗

正相柱分别用正己烷（HPLC级）,异丙醇（HPLC级）,二氯甲烷（HPLC级）,甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大。

可降低流速,避免压力过高)注意使用溶剂的次序不要颠倒,用甲醇冲洗完后,再以相反的次序冲洗至正己烷所有的流动相必须严格脱水

理论塔板数N可近似表示为：

理论塔板数=554(保留时间/半高峰宽)2 (2是平方)。

柱效率用理论塔板数定量地表示：N=16（t/w ）2。其中，t是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间，w为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。

在一色谱柱中用相同的洗脱条件时候，不同化合物的滞留时间与其洗脱峰宽度之比接近常数。因此理论塔板数大的色谱柱效率高。当然，N的大小和柱子长度有密切关系：理论塔板高度H=柱长/N，用H可以衡量单位长度的色谱柱的效率，H越小，则色谱柱效率越高。

N为常量时，W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。

可以。

1、反冲可以改善柱头死空间，色谱柱使用一段时间后柱效下降，此时可拆下柱入口端螺帽，去掉1-2mm被污染填料，再用相同填料填满，然后用流动相反冲一下，可使柱效恢复。

2、反冲可把沉积在过渡板上的细微颗粒冲走，也可用反冲技术使柱压降低。