1 Adele - "Set Fire To The Rain"
2 Adele - "Skyfall"
3 Alex Clare - "Too Close"
4 Calvin Harris feat Ne-Yo - "Let's Go"
5 Carly Rae Jepson - "Call Me Maybe"
6 Cher Lloyd - "Want U Back"
7 Chris Brown - "Don't Wake Me Up"
8 Chris Brown - "Turn Up The Music"
9 Christina Aguilera - "Your Body"
10 David Guetta feat Chris Brown & Lil Wayne - "I Can Only Imagine"
11 David Guetta feat Nicky Minaj - "Turn Me On"
12 David Guetta feat Sia - "Titanium"
13 Demi Lovato - "Give Your Heart A Break"
14 Ellie Goulding - "Lights"
15 Enrique Iglesias feat Sammy Adams - "Finally Found You"
16 Far East Movement feat Justin Bieber - "Live My Life"
17 Flo Rida - "Whistle"
18 Flo Rida feat Sia - "Wild Ones"
19 Fun - "Some Nights"
20 Fun feat Janelle Monáe - "We Are Young"
21 Gotye feat Kimbra - "Somebody That I Used To Know"
22 Gym Class Heroes feat Neon Hitch - "Ass Back Home"
23 Jennifer Lopez feat Pitbull - "Dance Again"
24 Jessie J - "Domino"
25 Justin Bieber feat Big Sean - "As Long As You Love Me"
26 Justin Bieber - "Boyfriend"
27 Karmin - "Brokenhearted"
28 Katy Perry - "Part Of Me"
29 Katy Perry - "Wide Awake"
30 Kelly Clarkson - "Stronger"
31 Ke$ha - "Die Young"
32 LMFAO - "Sorry For Party Rocking"
33 Madonna feat MIA & Nicky Minaj - "Give Me All Your Luvin'"
34 Maroon 5 - "One More Night"
35 Maroon 5 feat Wiz Khalifa - "Payphone"
36 Nelly Furtado - "Big Hoops (Bigger The Better)"
37 Ne-Yo - "Let Me Love You (Until You Learn To Love Yourself)"
38 Nicky Minaj - "Pound The Alarm"
39 Nicky Minaj - "Starships"
40 One Direction - "Live While We're Young"
41 One Direction - "What Makes You Beautiful"
42 Owl City & Carly Rae Jepson - "Good Time"
43 P!nk - "Blow Me (One Last Kiss)"
44 Pitbull feat Chris Brown - "International Love"
45 PSY - "Gangnam Style"
46 Rihanna - "Diamonds"
47 Rihanna - "Where Have You Been"
48 Rita Ora - "How We Do (Party)"
49 Swedish House Mafia - "Don't You Worry Child"
50 Tyga - "Rack City"
51 Usher - "Climax"
52 Usher - "Scream"
53 The Wanted - "Glad You Came"
54 WillIAm feat Eva Simons - "This is Love"
55 Zedd feat Matthew Koma - "Spectrum"
泡泡玛特角色有64个,经典的有molly系列:歌女Molly白、公主、Molly蓝、番茄、杀手Molly、空姐Molly红、公主、Molly粉、海女Molly绿(Molly开心火车大派对系列)等,还有DIMOO系列、LABUBU、YUKI、BUNNY、懒蛋君、大猫、helloKitty、蜜语娃娃等。
2020年12月11日,泡泡玛特国际集团有限公司在港股挂牌上市2010年11月,泡泡玛特第一家门店在北京欧美汇购物中心开业。
泡泡玛特,成立于2010年,发展近十年来,围绕艺术家挖掘、IP孵化运营、消费者触达以及潮玩文化推广与培育四个领域,POP MART泡泡玛特旨在用创造潮流,传递美好的品牌文化构建了覆盖潮流玩具全产业链的综合运营平台。
在泡泡玛特发家致富的这几年,也正好是抖音、快手等短视频飞速崛起的时期,年轻人的时间变成了碎片,拖着疲惫的身躯寻找即时的刺激,这一切,王宁看在眼里,他曾经说,买盲盒就像买冰淇淋,存在的意义就是让消费者获得5-10分钟的多巴胺。
POP的话是捷安特的入门山地车 价格一般都在700左右 波普系列的车款有 POP10 POP20 POP30 价格都不是很高 最基础的10是18速 碳钢的车身 相对来说是比较经济的代步车 20的话是21速普通的直播比10的变速有了一定的提升 30的话再车圈跟变速把手上都有了明显的提升21速的喜玛诺 但是价格要高一些 大概在898左右 是波普系列比较高端的产品 这一系列的车子比较适合代步 人群的话应该是定义在中青年吧
泡泡玛特温度系列只有隐藏款变色。泡泡玛特温度系列含12款常规款,1款隐藏款,隐藏款的概率为1:144,隐藏采用冷感变色漆,冰冷温度下,面具、衣服和周边的物件都呈黑色给玩家带来全新的体验与玩法,系列内采用温软的颜色,清新治愈,表面采用PU油光涂料,给人一种瓷器的质感,均为闭眼的造型,意在屏蔽纷杂,阻隔联想,透过不同的感官去感知周遭的世界。
DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。
原理 ABI PRISM
310型基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在CCD摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列,从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。
它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子聚合物,包括DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)。这些凝胶颗粒孔径均一,避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集,分析和仪器运行等软件。它使用最新的CCD摄影机检测器,使DNA测序缩短至25h,PCR片段大小分析和定量分析为10~40min。
由于该仪器具有DNA测序,PCR片段大小分析和定量分析等功能,因此可进行DNA测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析,临床上可除进行常规DNA测序外,还可进行单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测、HLA配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。
试剂与器材
1.BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix,内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA
polymerase FS,反应缓冲液等。
2.pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板 02g/L,试剂盒配套试剂。
3.M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT,32μmol/L,即32pmol/μl,试剂盒配套试剂。
4.DNA测序模板
可以是PCR产物、单链DNA和质粒DNA等。模板浓度应调整在PCR反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒DNA,浓度为02g/L,即200ng/μl。
5.引物
需根据所要测定的DNA片段设计正向或反向引物,配制成32μmol/L,即32pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物,如M13(-21)引物,T7引物等。
6.灭菌去离子水或三蒸水。
7.02ml或和05ml的PCR管 盖体分离,PE公司产品。
8.3mol/L 醋酸钠(pH52) 称取408g NaAc•3H2O溶于70ml蒸馏水中,冰醋酸调pH至52,定容至100ml,高压灭菌后分装。
9.70%乙醇和无水乙醇。
10.NaAc/乙醇混合液 取375ml无水乙醇和25ml 3mol/L NaAc混匀,室温可保存1年。
11.POP 6测序胶 ABI产品。
12.模板抑制试剂(TSR) ABI产品。
13.10×电泳缓冲液 ABI产品。
14.ABI PRISM 310型全自动DNA测序仪。
15.2400型或9600型PCR仪。
16.台式冷冻高速离心机。
17.台式高速离心机或袖珍离心机。
操作步骤
1.PCR测序反应
(1) 取02ml的PCR管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂:
所加试剂 测定模板管 标准对照管
BigDye Mix 1μl 1μl
待测的质粒DNA 1μl -
pGEM-3Zf (+) 双链DNA - 1μl
待测DNA的正向引物 1μl -
M13(-21)引物 - 1μl
灭菌去离子水 2μl 2μl
总反应体积5μl,不加轻矿物油或石蜡油,盖紧PCR管,用手指弹管混匀,稍离心。
(2) 将PCR管置于9600或2400型PCR仪上进行扩增。98℃变性2min后进行PCR循环,PCR循环参数为96℃ 10s,50℃
5s,60℃4min,25个循环,扩增结束后设置4℃保温。
2.醋酸钠/乙醇法纯化PCR产物
(1) 将混合物离心,将扩增产物转移到15ml EP管中。
(2) 加入25μl醋酸钠/乙醇混合液,充分振荡,置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于4℃离心30 min,小心弃上清。
(3) 加70%(V/V)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12 000r/min于4℃离心5min,小心弃上清和管壁的液珠,真空干燥沉淀10~15min。
3.电泳前测序PCR产物的处理。
(1) 加入12μl的TSR于离心管中,剧烈振荡,让其充分溶解DNA沉淀,稍离心。
(2) 将溶液转移至盖体分离的02ml PCR管中,稍离心。
(3) 在PCR仪上进行热变性(95℃ 2min),冰中骤冷,待上机。
4.上机操作
按仪器操作说明书安装毛细管,进行毛细管位置的校正,人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。仪器将自动灌胶至毛细管,12kV预电泳5min,按编程次序自动进样,再预电泳(12kV,20min),在75kV下电泳2h。电泳结束后仪器会自动清洗,灌胶,进下一样品,预电泳和电泳。每一个样品电泳总时间为25h。电泳结束后仪器会自动分析或打印出彩色测序图谱。
5.仪器将自动进行序列分析,并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知,可通过序列比较以星号标出差异碱基处,提高工作效率。
6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。
计算
测序反应精确度计算公式:100%-差异碱基数(不包括N数)/650×100%
差异碱基即测定的DNA序列与已知标准DNA序列比较不同的碱基,N为仪器不能辨读的碱基。
注意事项与评价
1.ABI PRISM 310基因分析仪是高档精密仪器,需专人操作、管理和维护。
2.本实验测序PCR反应的总体积是5μl,而且未加矿物油覆盖,所以PCR管盖的密封性很重要,除加完试剂后盖紧PCR管盖外,最好选用PE公司的PCR管。如PCR结束后PCR液小于4~45μl,则此PCR反应可能失败,不必进行纯化和上样。
3.作为测序用户来说,只需提供纯化好的DNA样品和引物,一个测序PCR反应使用的模板不同,需要的DNA量也就不同,PCR测序所需模板的量较少,一般PCR产物需30~90ng,单链DNA需50~100ng,双链DNA需200~500ng,DNA的纯度一般是A260nm/A280nm为16~20,最好用去离子水或三蒸水溶解DNA,不用TE缓冲液溶解。引物用去离子水或三蒸水配成32pmol/μl较好。
4.本实验使用的测序试剂盒是BigDye荧光标记终止底物循环测序试剂盒,一般可测DNA长度为650bp左右。本仪器DNA测序精确度为(985±05)
%,仪器不能辨读的碱基N<2%,所需测定的长度超过了650bp,则需设计另外的引物。为保证测序更为准确,可设计反向引物对同一模板进行测序,相互印证。对于N碱基可进行人工核对,有时可以辨读出来。为提高测序的精确度,根据星号提示位置,可人工分析该处彩色图谱,对该处碱基作进一步核对。
具体的配置方法,你拿到产品说明书都有的,一般的实验室都有相关的配方。
由上篇文章我们已经得知邮件从发送到接收的过程:
发件人->MUA->MTA->若干MTA->MDA->MUA->收件人
本节接收邮件主要就是编写一个 MUA 客户端,从 MDA 将邮件取回本地。
收取邮件最常用的是 POP协议 ,目前版本是第三版,也称 POP3 。python内置了 poplib 模块,支持POP3协议。
回想上一节 SMTP ,我们对要发送的邮件内容进行了各种编码,包括添加MIME header,编码之后再进行发送。
因此,我们通过POP3协议接收的也不是原内容,而是经过一系列编码等处理的文本。
所以,要想把POP3收取的文本变为可阅读的邮件对象,就需要利用 email 模块对原始邮件进行解析。
所以,邮件收取的流程就是:
由上一篇 文章 最后总结部分可知。邮件由字符到发送到网络经历了如下的格式转化:
纯文本:
str->bytes->base64->str->bytes
二进制文件:
binary code->base64->str->bytes
我们解析邮件也是按这个思路,逆序解析出内容。
这里的 decode('utf-8') 先把字节流转化为字符串,再将字符串转化为 message 结构的对象。这步与发送邮件的 as_string 函数相反。
先从上一节结构化的 msg 中取出信件头,打印出来。
如果是 multipart 结构, get_payload 函数会返回一个包含不同part的list,然后对每一part递归调用 print_info ,打印子信件头和子信件内容。
不是 multipart 时,之后再依据 Content-Type 作不同处理:
如果是 text :
利用 get_payload(decode = Ture) 取出子信件的内容, decode 为True,则按照 Content-Transfer-Type 将 base64 或 QP 解码为 bytes 。
再 guess_charset 猜出编码方式,之后将其解码为字符显示。
如果不是 Text 对象,则为附件:
打印出附件的 Content-Type 。
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