跑胶太厚了,也跑不出来吗

是的，胶的厚度对电泳效果也有一定影响。如果胶的厚度太厚，会导致电泳过程中的电阻增大，从而影响到电泳的速度和分离效果。因此，在制作胶板时，需要控制好胶的厚度，以确保电泳的效率和分离效果。

同时，还有其他因素也可能影响电泳的效果，如缓冲液的浓度、成分、pH值等。因此，在进行电泳实验时，需要根据具体情况选择合适的条件，以获得最佳的实验效果。

OD值很好只能代表你的纯度高并不能代表你提的完整。所以RNA降解可能是你提的时候就降解了，也可能是跑胶的时候降解的。假设你提取的是完整的RNA，可能出问题的步骤有以下：1loading buffer ，确定是使用的RNA 专用的，且使用步骤是按说明书来的（有些是需要加热，冷却等步骤）

2电泳时间长，需用的电泳电压不恰当

3电泳液配置，电泳液中可能含RNA酶，将你的样品降解。

总之，降解可能是很多原因造成的，我没看到你的电泳图，也不知道你怎么提取得，不好确定到底是什么原因，你可以加我恰QQ272228132，可以讨论下。

提取完了用分光光度计能够测定浓度，跑胶主要看两个条带(18s,28s)都在，弥散多不多,从而判断RNA分子完整性。

http://wwwlabbasenet/News/ShowNewsDetails-2-11-0716260834924DD8html

核糖体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。在大肠杆菌中，rRNA量占细胞总RNA量的75%-85%，而tRNA占15%，mRNA仅占3-5%。

rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome），如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体的结构就会发生塌陷。原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为沉降系数（sedimentation coefficient），当用超速离心测定一个粒子的沉淀速度时，此速度与粒子的大小直径成比例。5S含有120个核苷酸，16S含有1540个核苷酸，而23S含有2900个核苷酸。而真核生物有4种rRNA，它们分子大小分别是5S、58S、18S和28S，分别具有大约120、160、 1900和4700个核苷酸。

RNA样品电泳后，可见28S、18S及5S小分子RNA条带，则说明完整性好。若有降解可能是操作不当或污染了RNase。28S和18S RNA比值约为2：1,表明RNA无降解。如比值逆转，则表明RNA降解。

透气型塑胶跑道底层材料为：胶水、黑颗粒，胶水由聚醚和环保型MDI混合做成预聚体；红、黑颗粒为环保材料在特制的平台上制成胶片，经过切割，打碎，筛选出粒径为3～5mm的黑颗粒作为打底专用标准型颗粒，筛选出15mm左右的红、绿颗粒面层

博凌科为-为你解答：1模板可能有降解，建议避免反复冻融，放置时间不能太长。模板的质量是最重要的。2抽提RNA时有污染，包括基因组DNA污染和蛋白质污染，需重 做抽提。3提高退火温度，减少非特异性扩增。4减少循环次数，减少非特异性扩增。5电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子浓度明显 改变。6电泳时电压不能太高，8V/cm。7一般来讲，基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中，Mg和dNTP的浓度是相 匹配的，不需改动。8 加样量过大。过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。9制胶过程中胶孔没 制好。10 EB没有冲洗干净。11模板混有基因组DNA，或模板中混有蛋白。12非特异反映。引物设计的不好，非特异，这种情 况容易出现非特异扩增造成有非特异性扩增带或拖尾现象。13电泳液用久了不换，电泳胶脏了 。14扩增的条件不合适，一般退火温度低时容 易使引物在非特异位置结合引发扩增反应造成拖尾。针对以上情况，可以先提高退火温度试试，如果实在不行，再看看引物是不是合适。如果 内参可以扩出来，只能说明程序可能是适合的，但不能完全说明体系合适。体系内的各组分，如模板、dNTP、Mg离子、引物等都可能造成拖尾。先得考虑换了 那种成分后出现了拖尾，逐项试验。引物当然是最重要的因素，但绝非造成拖尾的唯一原因。而且，一般而言，拖尾不会是引物的问题，尤其是已经被用过证明能扩 出特异片段的 引物，更不可能是它的问题了。先不要加Taq酶，等到其他东西都加完了以后，放到PCR仪上去，到那时再加，马上开启PCR程序试试。检 查一下你的dNTP的量够不够。适当减少2～3个循环试试，可能会有效果。

三条是主带

哺乳动物的RNA包括mRNA，rRNA，tRNA和小RNA，根据分子量和沉降系数的不同，rRNA又可分为28s, 18s 和5s 的rRNA。从RNA的含量上看，rRNA是几种RNA中最多的，高达90%以上，而mRNA很少，只有1-2%，而其他两种RNA的分子量比较小，这就解释了为什么从凝胶电泳的结果上只能看到三条带。而这三条带的完整性，就代表了mRNA的完整性，也就是说如果我们观察到这三条带是清新完整，就说明我们提取到的RNA质量比较好，反之，如果观察到这三条带成弥散状，就说明我们提取到的RNA比较不好。

核糖体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。在大肠杆菌中，rRNA量占细胞总RNA量的75%-85%，而tRNA占15%，mRNA仅占3-5%。

rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome），如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体的结构就会发生塌陷。

原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为沉降系数（sedimentation coefficient），当用超速离心测定一个粒子的沉淀速度时，此速度与粒子的大小直径成比例。5S含有120个核苷酸，16S含有1540个核苷酸，而23S含有2900个核苷酸。而真核生物有4种rRNA，它们分子大小分别是5S、58S、18S和28S，分别具有大约120、160、 1900和4700个核苷酸。

RNA样品电泳后，可见28S、18S及5S小分子RNA条带，则说明完整性好。若有降解可能是操作不当或污染了RNase。28S和18S RNA比值约为2：1,表明RNA无降解。如比值逆转，则表明RNA降解。

应该从下到上：5s、18s、28s、

120、1900、4700bp、

提取的总RNA跑胶从大到小有带3条，

5S，18S，28S。 5S应该最暗，28S应该最亮。和DNA Marker比较的话，28S大概在5K左右，18S大概在3K左右，58S和5S是用琼脂糖是分开不了的，只是一条很弱的条带，在100BP左右，好的RNA要求28S亮度是18S的两倍。