为什么dna扩增处于两个引物之间的系列？

刚开始的时候,扩增的不只是位于引物之间的,但是随着循环的增加,引物之间的区域为指数增长,其他就可以忽略不计了

这里有个动画,做的很好,10,引物的作用主要有两点：第一决定了基因扩增的起点和终点，也就是你说的这一点。第二个作用是配合dna聚合酶实现的，因为只有的退火完成引物和单链DNA结合后，DNA聚合酶检测到上一个碱基已经配对成功才会顺着5‘-3’的方向进行延伸。

关于你的问题，PCR扩增的产物会有两种：长片段产物和段片段产物，建议你先理解一下PCR扩增方向的问题就会明白了。希望对你有帮助。,1,建议你找pcr扩增原理的图解看下，一看就明白。,0,

DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。

原理 ABI PRISM

310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子聚合物，包括DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)。这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。它使用最新的CCD摄影机检测器，使DNA测序缩短至25h，PCR片段大小分析和定量分析为10～40min。

由于该仪器具有DNA测序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行DNA测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，临床上可除进行常规DNA测序外，还可进行单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测、HLA配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。

试剂与器材

1．BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix，内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP，AmpliTaq DNA

polymerase FS，反应缓冲液等。

2．pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板 02g/L，试剂盒配套试剂。

3．M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT，32μmol/L，即32pmol/μl，试剂盒配套试剂。

4．DNA测序模板

可以是PCR产物、单链DNA和质粒DNA等。模板浓度应调整在PCR反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒DNA，浓度为02g/L，即200ng/μl。

5．引物

需根据所要测定的DNA片段设计正向或反向引物，配制成32μmol/L，即32pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如M13(-21)引物，T7引物等。

6．灭菌去离子水或三蒸水。

7．02ml或和05ml的PCR管 盖体分离，PE公司产品。

8．3mol/L 醋酸钠(pH52) 称取408g NaAc•3H2O溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调pH至52，定容至100ml，高压灭菌后分装。

9．70%乙醇和无水乙醇。

10．NaAc/乙醇混合液 取375ml无水乙醇和25ml 3mol/L NaAc混匀，室温可保存1年。

11．POP 6测序胶 ABI产品。

12．模板抑制试剂(TSR) ABI产品。

13．10×电泳缓冲液 ABI产品。

14．ABI PRISM 310型全自动DNA测序仪。

15．2400型或9600型PCR仪。

16．台式冷冻高速离心机。

17．台式高速离心机或袖珍离心机。

操作步骤

1．PCR测序反应

(1) 取02ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂：

所加试剂 测定模板管 标准对照管

BigDye Mix 1μl 1μl

待测的质粒DNA 1μl －

pGEM-3Zf (+) 双链DNA － 1μl

待测DNA的正向引物 1μl －

M13(-21)引物 － 1μl

灭菌去离子水 2μl 2μl

总反应体积5μl，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，稍离心。

(2) 将PCR管置于9600或2400型PCR仪上进行扩增。98℃变性2min后进行PCR循环，PCR循环参数为96℃ 10s，50℃

5s，60℃4min，25个循环，扩增结束后设置4℃保温。

2．醋酸钠/乙醇法纯化PCR产物

(1) 将混合物离心，将扩增产物转移到15ml EP管中。

(2) 加入25μl醋酸钠/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于4℃离心30 min，小心弃上清。

(3) 加70%(V/V)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12 000r/min于4℃离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10～15min。

3．电泳前测序PCR产物的处理。

(1) 加入12μl的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。

(2) 将溶液转移至盖体分离的02ml PCR管中，稍离心。

(3) 在PCR仪上进行热变性(95℃ 2min)，冰中骤冷，待上机。

4．上机操作

按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。仪器将自动灌胶至毛细管，12kV预电泳5min，按编程次序自动进样，再预电泳(12kV，20min)，在75kV下电泳2h。电泳结束后仪器会自动清洗，灌胶，进下一样品，预电泳和电泳。每一个样品电泳总时间为25h。电泳结束后仪器会自动分析或打印出彩色测序图谱。

5．仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。

6．测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。

计算

测序反应精确度计算公式：100%－差异碱基数(不包括N数)/650×100%

差异碱基即测定的DNA序列与已知标准DNA序列比较不同的碱基，N为仪器不能辨读的碱基。

注意事项与评价

1．ABI PRISM 310基因分析仪是高档精密仪器，需专人操作、管理和维护。

2．本实验测序PCR反应的总体积是5μl，而且未加矿物油覆盖，所以PCR管盖的密封性很重要，除加完试剂后盖紧PCR管盖外，最好选用PE公司的PCR管。如PCR结束后PCR液小于4～45μl，则此PCR反应可能失败，不必进行纯化和上样。

3．作为测序用户来说，只需提供纯化好的DNA样品和引物，一个测序PCR反应使用的模板不同，需要的DNA量也就不同，PCR测序所需模板的量较少，一般PCR产物需30～90ng，单链DNA需50～100ng，双链DNA需200～500ng，DNA的纯度一般是A260nm/A280nm为16～20，最好用去离子水或三蒸水溶解DNA，不用TE缓冲液溶解。引物用去离子水或三蒸水配成32pmol/μl较好。

4．本实验使用的测序试剂盒是BigDye荧光标记终止底物循环测序试剂盒，一般可测DNA长度为650bp左右。本仪器DNA测序精确度为(985±05)

%，仪器不能辨读的碱基N＜2%，所需测定的长度超过了650bp，则需设计另外的引物。为保证测序更为准确，可设计反向引物对同一模板进行测序，相互印证。对于N碱基可进行人工核对，有时可以辨读出来。为提高测序的精确度，根据星号提示位置，可人工分析该处彩色图谱，对该处碱基作进一步核对。

具体的配置方法，你拿到产品说明书都有的，一般的实验室都有相关的配方。

很多人在怀孕之后就会减少化妆品的使用，因为里边都有一些化学物质，不知道会不会对宝宝造成一定的影响。宝宝在妈妈的肚子里是很脆弱，经不起任何化学元素，但是生完宝宝以后就不一定了，那么生完宝宝后自然堂哺乳期可以用吗？

自然堂哺乳期可以用吗

乳期间，可以用点洗面奶或保湿霜等护肤品，护肤品含有天然植物成分，哺乳期间可以适量的擦点使用。再就是哺乳期间不能擦粉，不要使用眼影、腮红、唇膏等化妆品。因为里面含有色素和一些微化学成分，所以对宝宝的健康是不利的。如果可以的话还是尽量少用吧，毕竟现在的良心产品不是很多，用太多对孩子不好。

哺乳期用化妆品的危害

1、化妆品是一种非常普遍，尤其是女性常用的生活用品。部分化妆品中含有致癌物质须谨慎使用，尤其是孕妇和哺乳期女性不要使用。以煤焦油为原料合成的香料被广泛用于化妆品中，而其中的的化学成分的作用很大，极易导致DNA畸形、突变，从而诱发癌症。

2、哺乳期的妈妈为了孩子的健康着想，那些含有化学物质，刺激性的产品是不能使用的。有害的物质通过母亲的皮肤吸收以后，会通过乳汁进入宝宝体内，而宝宝的免疫力不够强大，而且皮肤也很娇嫩，难免会对宝宝造成伤害。

一般宝妈在怀孕期间都会选择一些纯天然不含特殊成分的产品来进行简单护肤，因为大部分的女性是不想在怀孕的这几个月里变的很沧桑的，虽然怀孕以后会让孕妇气色变好，但是还是少不了要做一些简单的护肤，只要不化妆一般都是没有太大问题的。

在DNA的碱基序列中一对或少数几对邻接的核苷酸的增加或减少，造成该位置后的一系列编码发生了变化，成为移码突变，如下表： T　　ACCCATTA　　TAC(缺失一个C) CATTA　　　　　　1，DNA复制过程中的自发突变。此类引起突变的频率很低。

2，诱导突变。由于物理、化学原因，导致DNA发生了改变。例如射线（紫外线，伦琴射线等）。

t2噬菌体是一种专门寄生在细菌体内的病毒，t2噬菌体侵染细菌后，就会在自身遗传物质的作用下，利用细菌体内的物质来合成自身的组成成分，从而进行大量增殖。t2噬菌体头部和尾部的外壳是由蛋白质构成的，在它的头部内含有一个dna分子。

而大肠杆菌则会死亡。

添加的材料比屈臣氏贵

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