实验室常用的细胞培养液的主要成分是氨基酸、葡萄糖、无机盐、维生素和微量元素等。为了维持稳定的pH,培养液中一般有一个pH缓冲系统,同时常加入少量的酚红作为pH指示剂。另外培养液中一般需要加入一定量的血清。
培养液中的氨基酸除了13种细胞生长所必须的氨基酸外,往往加入一些非必需的氨基酸以促进细胞的生长。在必需的氨基酸中,L-谷氨酰胺在溶液中不稳定(在4℃培养溶液中半衰期为3个星期,37℃中为1个星期),需要在使用时加入。
葡萄糖在培养液中的含量一般为1g/L(低糖)或45g/L(高糖)。它是细胞代谢重要的能量来源。
细胞培养液中都有一个平衡盐系统,用于维持细胞的渗透压、维持pH和细胞正常的代谢等。最常用的平衡盐系统有Dulbecco's phosphate buffered saline (D-PBS); Earle's balanced salts (EBSS) 和 Hanks' balanced salts (HBSS)。它们都含有细胞所必需的5种离子:钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和磷酸根。培养液中的pH缓冲系统一般是碳酸氢钠和HEPES等。
培养液中的维生素包括叶酸、维生素B、烟酰胺和吡哆醇等。培养液中的微量元素元素包括Cu2+ ,Zn2+ ,和Mn2+等。
血清中含有生长因子、促进细胞帖壁的因子、矿物质、激素、脂类等,另外血清可以抑制胰酶的活性。
一般培养液都含酚红作为pH指示剂,它是细胞培养液状态的一个很好的标志。过长时间的培养或者微生物的污染都会使培养液的pH发生改变。需要注意的是,酚红可以模拟类固醇激素(尤其是雌性激素)的作用,所以如果培养的细胞对雌性激素敏感(比如实验本身就是研究雌性激素对细胞的作用),就应当使用没有酚红的培养液。
cm培养基配方是基础培养基添加血清、抗生素等物质。
cm培养基即完全培养基,基础培养基添加血清、抗生素等物质后,叫完全培养基,也叫(血清)细胞培养基。
基础培养基只能维持细胞生存,要想使细胞生长和繁殖,还需添加天然培养基,常用的是牛血清,因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。
此外为防止污染,培养液中尚需加一定量的抗生素。 完全培养基根据添加血清量的多少,可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基,用于不同细胞和不同研究。
培养基的注意事项:
绝大多数的培养基都是建立在平衡盐溶液(BSS)的基础上的,再往其中添加氨基酸、维生素以及其它与血清中浓度相似的营养物质,这样就形成了初步也是基础的培养基。
我们熟知的也是被广泛应用的培养基“Eearle`s MEM ”的混合物,其中就包含了13种必须氨基酸和8种维生素。而次于MEM的Ham`s F12 也包含了许多非必须氨基酸,含有的维生素的范围亦是很广阔,另外也含有常规无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。
细胞培养基1640和DMEM是有区别的,区别如下:
1、成分不同。
1640培养基含有10%胎牛血清。DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基。
2、用途不同。
1640培养基主要用于悬浮细胞培养。可适用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养。DMEM培养基适用于贴壁细胞生长,如各种实体瘤贴壁细胞。
3、培养方式不同。
1640培养基是日常细胞培养最常用的培养液,含有细胞培养所需的基本营养成分。DMEM培养基是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长,适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
扩展资料:
对于日常的肿瘤细胞株而言,大多数两种培养液都是可以的,但是有一点,就是在同一个细胞株中间不要频繁的切换两种培养液,因为毕竟两种培养液的成分有不同,在切换的过程中细胞有一个适应的过程。
绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。
-RPMI-1640培养基
-DMEM培养基
RPMI-1640 细胞培养基成分 (配制时添加碳酸氢钠2000mg/L) 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 1 L-精氨酸 29000 21 硝酸钙 10000 2 L-门冬酰胺 5000 22 无水硫酸镁 4884 3 L-门冬氨酸 2000 23 无水磷酸二氢钠 676。
动物细胞培养基有平衡盐溶液、天然培养基、合成培养基、无血清培养液等四种。
平衡盐溶液:目前常用的平衡盐溶液有乳酸钠和复方氯化钠溶液(186%乳酸钠溶液和复方氯化钠溶液之比为1:2)与碳酸氢钠和等渗盐水溶液(125%碳酸氢钠溶液和等渗盐水之比为1:2)两种。
天然培养基:天然培养基也称复合培养基,是含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物。
天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,缺点是成分复杂,来源受限。
合成培养基:合成培养基(synthetic medium),又称为组合培养基,是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的,其所含的成分(包括微量元素在内)以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究。
无血清培养液:无血清培养液是不含血清而含有支持细胞增殖和生物反应的多种营养成分(如生长因子、组织提取物等)的细胞培养液。
无血清培养液由基础培养液和附加成分组成,取代血清的补充物:
1、激素和生长因子;
2、结合蛋白类;
3、低分子量营养因子;
4、贴壁和铺展因子等。
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