1、成分不同。
1640培养基含有10%胎牛血清。DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基。
2、用途不同。
1640培养基主要用于悬浮细胞培养。可适用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养。DMEM培养基适用于贴壁细胞生长,如各种实体瘤贴壁细胞。
3、培养方式不同。
1640培养基是日常细胞培养最常用的培养液,含有细胞培养所需的基本营养成分。DMEM培养基是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长,适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
扩展资料:
对于日常的肿瘤细胞株而言,大多数两种培养液都是可以的,但是有一点,就是在同一个细胞株中间不要频繁的切换两种培养液,因为毕竟两种培养液的成分有不同,在切换的过程中细胞有一个适应的过程。
绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s
MEM
的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s
F12
也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12
这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。
搜狗百科-RPMI-1640培养基
搜狗百科-DMEM培养基
一、细胞培养所需的培养液
在细胞的研究和利用过程中,最主要的是要为细胞提供最适的生长条件,保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一,近乎呆板地坚守细节和常规,而且细胞培养,试剂昂贵,费时、费力,不是随随便便就可以进行的。
细胞只有在最适生长条件下,才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣,就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些营养成分或生长因子用量不足或细胞高密度培养时间过长,都不是最适生长条件。
二、平衡盐溶液
平衡盐溶液具有维持渗透压、调节酸碱平衡的作用,同时可以供给细胞生存所需的能量和无机离子成分。最常用于洗涤组织或细胞、配制培养用液的基础溶液是Hanks 溶液和磷酸缓冲盐溶液(简称PBS) 。
三、血清
血清中含有丰富的营养成分,包括多种生长因子及许多未知成分。动物细胞的生长都依赖血清。血清的种类很多,包括胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等。
选择一批最适于细胞的血清是很重要的,而且如有可能的话,应要求购买来源公司保留足量,以供应实验使用。这样可避免反复试用以选择最适血清所产生的费用。血清的质量可以通过检测细胞的克隆形成率来衡量。取对数生长期的细胞彻底消化后,以低密度(直径6mm 的平皿中加入约103个细胞)接种5~6 个平皿, 其中一个平皿中加入含30%血清的培养液,以测定高浓度血清的细胞毒作用。7~ 10d 后,出现肉眼可见的克隆时,倒掉培养液, 2%亚甲蓝染色2~5min,观察克隆形态、计算克隆形成率。克隆形成率一般为5%~ 10%。
四、抗生素
一般细胞培养时,抗生素不是必需添加成分。但一些特殊情况下培养液内需加入适量的抗生素,如怀疑有污染、原代培养时、新手操作不够熟练。常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素。青霉素常用剂量为100U/ml ,链霉素常用剂量为100μg/ml。常配制成100 倍或200 倍, 分装为小包装, 于-20℃条件下保存。一次用一个小包装, 避免反复冻融 。
五、特殊的添加因子
特殊的添加因子可以使细胞培养的条件得到优化。原代培养细胞接种密度需适当提高,应尽可能用营养丰富的培养液,如使用胎牛血清。这些都属于一般优化条件。细胞培养条件优化的原则是:根据细胞类型, 模拟体内环境, 添加不同的细胞生长因子及有利于细胞生存、增殖的添加剂。表1 是常用的细胞培养添加成分。
表 1 常用的细胞培养添加成分
一种细胞生长因子常常是多种细胞的丝裂原,如碱性FGF, 不仅是成纤维细胞的丝裂原,还是内皮细胞、角质细胞、黑素瘤细胞的丝裂原。EGF 可促进上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞及平滑肌细胞等多种细胞的增殖。
培养干细胞时,常添加白血病抑制因子( leukemia inhibitory factor, LIF ) ,又称分化抑制因子( DIA ), 是一种分泌型多肽,可抑制小鼠干细胞的自然分化。一般,可用纯化的LIF 直接加到培养液中,或使用用LIF表达载体转染过的饲养层细胞。正常的STO 细胞也可分泌。STO 细胞还分泌其他一些促干细胞生长的因子。目前,多数实验室仍使用饲养层细胞。重组的LIF 来源方便,与STO 细胞一起使用时,常用浓度为1000U/ml 。与小鼠胚胎成纤维细胞一起使用时,常用浓度为500U/ml 。
体外培养正常细胞需要使用不同生长因子的选择性组合。通常在已有的经典培养液配方基础上,添加不同因子而成。现在已有多种特定细胞培养液,且有商品供应,如血管内皮细胞培养液、神经干细胞培养液、骨髓干细胞培养液、间充质干细胞培养液、小鼠心肌细胞培养液(Claycomo Medium) 等。
六、消化液
细胞生长至一定密度时,需进行传代。消化液可使细胞脱离生长表面,离散成单个细胞。常用的消化液是025%、0125%的胰蛋白酶和002%的二乙胺四乙酸二钠(EDTA) 溶液,以无钙镁的PBS 或Hanks溶液配制。它们可单独使用,也可按一定比例混合后使用。大部分细胞的消化可使用终浓度为005%胰蛋白/002%EDTA混合液。有些上皮细胞贴壁力强,需较高浓度的胰蛋白酶(025%)或延长消化时间,甚至需要37°C温育。如果温育较长时间(超过20min)细胞仍不能脱壁,则应采取分步消化的措施,即将已脱壁细胞移出至离心管,加完全培养液中和胰蛋白酶的作用,对未脱壁的细胞再添加新胰蛋白酶再次消化。
七、细胞培养用的其他液体
细胞培养时,还会用到其他一些液体,如谷氨酰胺、HEPES 、丙酮酸钠、各种细胞生长因子、各种组织或细胞条件培养液,以及调整pH 使用的56%NaHCO3等。
谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,会导致细胞因生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,故要适时添加。可配制200倍液体-20℃ 冰箱中保存,在使用前加入培养液内,终浓度为2mmoVL 。
HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 72~74 范围内具有较好的缓冲能力,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠( 034g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。安全浓度范围10~25mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。一些生长缓慢的细胞加入,可明显改善细胞状态。通常配制200倍液,-20℃ 冰箱保存,在使用前加入培养液内终浓度为1mmol/L。
另外, 2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol, 2-Me) 对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清, 有直接刺激细胞增殖作用。2-Me 的活性部分是硫氢基,其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽,能诱导细胞的增殖,为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA 合成,增加植物凝集素(PHA) 对淋巴细胞的转化作用,已广泛应用于杂交瘤技术。也开始用于一些难以培养的细胞。常用终浓度为5×10-5mol/L。常配制成01mol/L 的储存液,用时每升培养液加05ml 。
细胞培养基是生物制品的制备和生产的基础
细胞培养基的构成
细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增值的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基通常包含培养细胞的能量来源和调节细胞周期的化合物,其中包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖和血清等。目前,由于无血清培养基更容易进行纯化和下游加工,并且及其制品安全性和产量更稳定。在科研及商业领域的应用日渐广泛。
细胞培养基的分类
动物细胞培养基按照配制原料的来源可分为天然的培养基和合成培养基。天然培养基仅由天然生成的生物液体组成,使用范围广但其成分不稳定,合成培养基通过添加一些营养物质(有机物和无机物)维生素、盐、血清蛋白、碳水化合物和辅因子等制备而成,常用于研发与量产。
细胞培养基发展到目前,几乎所有的动物培养基根据添加物的类别可以分为,含血清培养基,无血清培养基,无蛋白培养基以及化学成分限定培养。
植物组织培养液体培养基的成分
植物组织培养基的成分主要是水,蔗糖,矿质营养-无机盐,植物激素和琼脂等通常属于固态培养基动物细胞培养液是液态培养基,主要成分是水,糖类-葡萄糖,无机盐,生长因子和动物血清等动物血清可以提供现在还不知道的必不可少的营养物质另外它们的无机盐的成分浓度等不一样
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