293T人胚肾细胞能用1640培养基培养吗

293T细胞的培养 ： 293T细胞是由293 细胞派生, 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。 培养条件为: 完全培养基: 高糖 DMEM, 10% 胎牛血清; 冻存液: 胎牛血清或完全培养基, 10% DMSO。 传代方法为: 1．吸掉293T 细胞培养瓶内的培养液; 2．吸取适量的无Ca2+ 和Mg2+ 的PBS, 轻轻把贴壁的细胞洗两遍; 3．加少量的005% 胰蛋白酶-EDTA (一般25 cm2 的培养瓶加1 ml, 75 cm2 的培养瓶加2~3 ml), 放到培养箱温育20 s; 4．细胞消化完毕, 加适量培养液终止消化, 并吹打细胞, 制成均匀的细胞悬液; 5．加足量的培养液, 分装到新的培养瓶中。值得注意的是, 293T细胞的贴壁性不强, 轻微的干扰就可能使它们脱落。所以, 在更换新鲜培养液或者用PBS冲洗的时候应该小心地添加新的培液进去, 以液体不冲打到贴壁的细胞为好。 6、传代的时候, 只需要用005%胰蛋白酶-EDTA即可轻松把细胞消化下来, 不需要消化很长时间。有些同学反映293T 细胞容易结团不易被吹打开来。如果遇到这样的情况可以在加了胰蛋白酶温育一段时间后即拿1 ml 移液枪反复轻轻吹打, 直至肉眼看不到大的细胞块为止, 7、加适量的培养液混匀, 这时候在显微镜下观察, 可见大多数细胞都是单个的, 只有少量的2~3个细胞聚在一起。一般293T 细胞可以长在塑料的培养瓶底面上直到90% 融合, 再以1∶4~1∶8 的比率传代。合适的传代周期为2~3 天。 8、传代过程中, 消化的时间越短越好, 显微镜下观察到80%细胞脱落即可加培养液中止。 完成传代后放入培养箱前： 应该把培养瓶或培养皿沿X、Y轴方向水平移动几下, 防止细胞都聚在中间或者四周。冷冻293T 细胞的冻存液可以用95% 小牛血清加5% 二甲基亚砜, 复苏率很高。 293T细胞的生长状态直接关系到包装病毒和转染的效率, 应尽量选择传代次数少, 培养总时间短的细胞。从细胞形态上看, 相差显微镜下观察立体感强并且形态良好的细胞产病毒率或者转染效率都很高。 虽然293T细胞的应用非常广泛, 几乎每个实验室都有一株自己的293T 细胞株, 但是经常有同学提出: 为什么在正常的培养条件下, 细胞却很难传代下去, 包装病毒效率很低, 对转染效率也不满意呢？ 事实上, 引起类似问题的元凶是一种生物界最小的原核细胞生物－支原体。支原体污染后, 它们不会使细胞死亡而是与细胞长期共存, 培养基不发生浑浊, 细胞无明显变化, 外观上给人以正常感觉, 但事实上细胞正在受到到多方面影响, 如引起细胞变形, 影响DNA 合成, 抑制细胞生长等。我们曾经收集到四株分别来自四个不同实验室的293T 细胞, 经检测均为支原体阳性, 令人惊讶的是这四株细胞都已经不是典型的293T 细胞形态, 每两株之间比较竟然形状各不相同, 很难相信这是同一种细胞！这些支原体阳性细胞普遍传代周期长, 显微镜下观察细胞碎片多, 长期支原体感染已经使这些细胞羸弱不堪, 胞内DNA 和蛋白质合成受到严重的影响。 因此, 有效地防治支原体污染, 杜绝交叉感染对提高实验效率, 稳定实验结果至关重要。我们的经验是把防治支原体污染作为细胞培养的一项日常工作, 除了对细胞培养设备环境的清洁外, 还需在器材消毒, 操作员培训, 严格把关新引入细胞株的质量等方面做大量细致的工作

（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基98g，碳酸氢钠19g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH72～74无菌过滤冻存备用。

（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。

（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。

（4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），01N稀盐酸液100ml。

（5）秋水仙素：10mg/ml无菌过滤高压灭菌（8磅10min）。

（6）磷酸缓冲液：pH74。

磷酸氢二钠288g(H2O)、磷酸二氢钾267g(无水)，溶于1000ml双蒸水中，加肝素，终浓度为100u/ml。

（7）Giemsa染色液：

Giemsa粉剂　　　　　　　　　　　1g

甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml

在研钵中，加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨，60℃温箱中保温2h，冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH74磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。

这个我只知道

3动物细胞培养的培养基

糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血浆、血清

还有哺乳动物胚胎培养液

无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清

植物组织培养的培养基中肯定要有植物激素、微量元素

至于其他的不要求掌握额

　　培养基被污染，如果是细菌污染，基本上会变浑浊。但如果是放在4度冰箱，变混浊的时间可能会久点。可以将培养液放至孵箱中，这样很快就可以加快细菌的生长，可以更快的检测是否发生污染。

　　当然，如果已经怀疑发生污染，肉眼又不可见时。可以到显微镜下观察，观察是否有细小的游动的颗粒。如果有基本上可以确定发生污染了。

1640是我们日常细胞培养最常用的培养液，含有细胞培养所需的基本营养成分；而DMEM是在MEM Eagle培养液基础上改良的。它增加了MEM Eagle培养液中12种不得不氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素成分的用量（加倍），葡萄糖用量可以选择低糖（1000mg/L)或高糖（4500mg/L）对于生长速度快，附着性稍差的肿瘤细胞生长有利。

对于日常的肿瘤细胞株而言，大多数两种培养液都是可以的，但是有一点，就是在同一个细胞株中间不要频繁的切换两种培养液，因为毕竟两种培养液的成分有不同，在切换的过程中细胞有一个适应的过程，而这个过程中细胞的状态就不是很好，会出现黑色颗粒的物质。

会破坏培养基里的成分。

你可以在超净工作台内用022um的滤器过滤DMEM或1640培养基一样可以达到你要的灭菌效果。

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至72-74，若pH值超过76或远低于68，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌022μm孔径滤膜滤过处理。